CD133+細(xì)胞在人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞移植治療小鼠心力衰竭中的作用.pdf

1、目的:CD133+細(xì)胞是臍帶血中重要的干細(xì)胞組分之一，假設(shè)在單個(gè)核細(xì)胞心力衰竭(heart failure，HF)治療中發(fā)揮作用的是某一種組分，那么多組分共存產(chǎn)生的空間位阻效應(yīng)可以影響這一組分進(jìn)入心肌的數(shù)量，因而純化的單一組分移植將提高治療效果。本研究想要證實(shí)CD133+細(xì)胞在人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞移植治療心力衰竭中所起的作用，即CD133+細(xì)胞4周后是否定植在小鼠心臟組織中，以及是否與其它組分具有協(xié)同作用。
　　方法:健康的8周齡B

2、alb/C裸小鼠26只，稱重，隨機(jī)數(shù)表法將小鼠隨機(jī)選出5只，作為假手術(shù)對(duì)照組。其余小鼠腹腔注射異丙腎上腺素(Isoprenaline，ISO)造模，5mg/Kg/天，共5天，假手術(shù)對(duì)照組腹腔注射同等體積生理鹽水作對(duì)照。小鼠常規(guī)飼養(yǎng)，觀察1周后，腹腔注射異丙腎小鼠隨機(jī)分為4組，每組5只，剪耳朵標(biāo)記，命名為:CD133+細(xì)胞組、CD133-細(xì)胞組、單個(gè)核細(xì)胞組和心衰對(duì)照組。采集足月妊娠順產(chǎn)嬰兒臍帶血，3小時(shí)內(nèi)，用淋巴細(xì)胞分離液法提取單個(gè)核細(xì)

3、胞，經(jīng)免疫磁珠分離CD133+細(xì)胞和CD133-細(xì)胞，用PBS稀釋，細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所得細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)在105/mL。經(jīng)鼠尾靜脈，CD133+細(xì)胞組注射CD133+細(xì)胞1mL，CD133-細(xì)胞組注射CD133-細(xì)胞1mL，單個(gè)核細(xì)胞組注射經(jīng)免疫磁珠分離后混合的單個(gè)核細(xì)胞1mL，心衰對(duì)照組和假手術(shù)對(duì)照組注射等量的PBS液1mL。常規(guī)飼養(yǎng)，4周后稱重，經(jīng)心內(nèi)穿刺取血，測(cè)血清MMP-9濃度。處死后開胸取心臟、肝臟及肺臟稱重，石蠟包埋心臟，做HE染

4、色、Masson染色檢驗(yàn)心肌纖維化和心肌細(xì)胞破壞程度，免疫組化及免疫熒光染色檢測(cè)是否存在人源性細(xì)胞。
　　結(jié)果:(1)實(shí)驗(yàn)前，各組小鼠體重組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;觀察期末，異丙腎造心衰模型各組小鼠體重明顯減低(分別為21.54±1.82g，22.2±1.72g，21.16±1.99g，21.66±1.06g)，與假手術(shù)組(24.48±1.45g)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05），但異丙腎造心衰模型各組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)意義;實(shí)驗(yàn)前后體重變化，心衰對(duì)照組(3.3±1.42g)明顯高于假手術(shù)組(0.88±0.29g)，但異丙腎造心衰模型各組間比較(分別為3.18±0.24g，2.92±3.38g，2.96±1.47g，3.3±1.42g)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)后異丙腎造心衰模型各組小鼠心臟、肝臟、肺臟質(zhì)量明顯大于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但異丙腎造心衰模型各組間比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)HE染色結(jié)果顯示，心衰造模各組小鼠，心肌排列紊亂，顯示局

6、限性心肌壞死，且主要集中在左室心尖部、左心室游離壁及室間隔位置，假手術(shù)組未發(fā)現(xiàn)明顯心肌紊亂;Masson染色可見心衰對(duì)照組(6277.97±374.18)和CD133-細(xì)胞組(6037.45±194.23)，藍(lán)色膠原纖維平均面積明顯增大(與假手術(shù)對(duì)照組相比，p＜0.05)，單個(gè)核細(xì)胞組(3290.30±424.41)和CD133+細(xì)胞組(2794.30±191.24)膠原纖維面積次之，假手術(shù)對(duì)照組(366.23±169.17)最小。與單

7、個(gè)核細(xì)胞組相比，CD133+細(xì)胞組膠原纖維平均面積更小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。(3)免疫組化及免疫熒光染色均未在小鼠心臟組織中找到特異性人源性細(xì)胞。(4)小鼠經(jīng)鼠尾靜脈注射細(xì)胞移植后4周，MMP-9濃度檢測(cè)結(jié)果顯示，腹腔注射異丙腎上腺素造心衰模型各組，其血清MMP-9濃度，組間比較(分別為1.61±0.68ng/mL,1.90±0.27 ng/mL,1.76±0.27 ng/mL,1.97±0.33 ng/mL)，差異無統(tǒng)計(jì)

8、學(xué)意義，但是明顯高于假手術(shù)對(duì)照組(0.88±0.47 ng/mL)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　結(jié)論:(1)人臍帶血CD133+細(xì)胞可改善HF裸小鼠心肌間質(zhì)纖維化。(2)CD133+細(xì)胞與臍血中其他干細(xì)胞組分可能不存在協(xié)同作用，但可能存在空間位阻效應(yīng)。(3)將人臍血干細(xì)胞移植給裸小鼠后4周，干細(xì)胞并未定植于心臟局部。(4)裸小鼠血清MMP-9濃度不是反映心衰后心肌纖維化程度的靈敏指標(biāo)。(5)異丙腎上腺素5mg/Kg/d