隨機(jī)引物PCR定量檢測血漿中循環(huán)DNA及其在腫瘤臨床的應(yīng)用.pdf

1、背景:外周血腫瘤標(biāo)記由于檢測的方便和非侵入性已逐步替代了受到標(biāo)本采集以及無法連續(xù)檢測和隨訪追蹤等諸多限制的組織學(xué)腫瘤標(biāo)記。而外周血循環(huán)DNA及其改變的分子生物學(xué)檢測正以其不可替代的優(yōu)點(diǎn)逐漸被人們所重視,并成為腫瘤細(xì)胞生物學(xué)及分子生物學(xué)研究中引人注目的一個(gè)亮點(diǎn)。血漿循環(huán)DNA的研究分為定性和定量兩種:前者主要檢測血漿中腫瘤特異性基因改變,定量檢測則以血循環(huán)DNA總量為指標(biāo),兩者均可反映腫瘤的存在和嚴(yán)重程度。早期檢測DNA含量的方法有二苯胺

2、法、溴化乙錠法、對流免疫電泳法及RNA-DNA雜交法等,但這些方法費(fèi)時(shí)且缺乏敏感性及特異性,這就需要我們進(jìn)一步改進(jìn)研究方法,使血漿循環(huán)DNA檢測更能反映血漿中的確切含量。同時(shí),其在腫瘤的臨床應(yīng)用價(jià)值也需進(jìn)一步深入研究。
　　 目的:建立隨機(jī)引物實(shí)時(shí)熒光定量PCR定量檢測血漿循環(huán)DNA的方法,并應(yīng)用于肺癌和肝癌患者的臨床研究,探討其在肺癌和肝癌診斷及監(jiān)測化療療效中的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　 材料和方法:建立隨機(jī)引物實(shí)時(shí)熒光定量

3、PCR檢測血漿循環(huán)DNA的方法并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；收集95例肺癌患者化療前后、40例肺良性疾病患者、60例肝癌患者介入前后、20例代償期肝硬化患者、20例活動性乙型肝炎患者和60例健康志愿者的血漿樣本,抽提血漿循環(huán)DNA,應(yīng)用隨機(jī)引物實(shí)時(shí)熒光定量PCR對以上血漿樣本進(jìn)行定量。另外,肝癌標(biāo)本AFP檢測應(yīng)用羅氏公司E170電化學(xué)發(fā)光免疫分析模塊檢測。所得結(jié)果應(yīng)用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：肺癌組、肺良性疾病組及健康

4、對照組血漿循環(huán)DNA水平分別為(42.5±21.3)ng/ml、(18.5±12.2)ng/ml和(11.5±10.7)ng/ml,肺癌組血漿循環(huán)DNA明顯高于肺良性疾病組及健康對照組,差異有顯著性(P<0.001),而對照組和良性疾病組之間差異無顯著性；肝癌組、肝硬化組和肝炎組血漿循環(huán)DNA濃度分別為(50.1±38.6)ng/ml、(30.5±14.6)ng/ml和(64.3±61.4)ng/ml,均明顯高于健康對照組(11.5±1

5、0.7)ng/ml,在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異(P<0.001),而肝癌組與肝硬化組及肝炎組之間的血漿循環(huán)DNA水平無明顯差異(P>0.05)；血漿循環(huán)DNA水平與肺癌和肝癌患者腫瘤大小、TNM分期均密切相關(guān)(P<0.05),而與肺癌的病理類型,與肝癌的腫瘤數(shù)目、有無腫瘤包膜、血清AFP濃度無明顯相關(guān)性(P>0.05)；血漿循環(huán)DNA水平在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ-Ⅳ期肺癌患者化療前后及Ⅰ-Ⅱ期、Ⅲ-Ⅳ期肝癌患者介入前后均有顯著差異(P<0.05)。