沉默兩個(gè)基因?qū)煞N藥劑處理的褐飛虱生殖及脂肪體生化影響.pdf

1、褐飛虱(Nilaparvata lugens(St(a)l))屬半翅目，飛虱科，是一種典型的殺蟲(chóng)劑誘導(dǎo)的再猖獗害蟲(chóng)。殺蟲(chóng)劑刺激生殖是褐飛虱再猖獗的主要原因之一。在大多數(shù)昆蟲(chóng)中，脂肪體是卵黃蛋白原合成的主要場(chǎng)所。卵黃蛋白在脂肪體中合成，分泌到血淋巴后特異性吸入到成熟的卵泡中，作為胚胎發(fā)育的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源。以往關(guān)于褐飛虱生殖的研究多集中于卵巢，關(guān)于脂肪體的研究多集中于家蠶、果蠅、埃及伊蚊等模式昆蟲(chóng)，在褐飛虱中仍屬首次。
　　1、不同藥劑處理

2、后褐飛虱脂肪體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析
　　為研究脂肪體在褐飛虱再猖獗機(jī)制中的作用，本研究利用iTRAQ技術(shù)對(duì)三唑磷和茚蟲(chóng)威處理的褐飛虱脂肪體進(jìn)行了蛋白質(zhì)組學(xué)研究，共鑒定到3431個(gè)蛋白質(zhì)，與對(duì)照相比有685個(gè)差異顯著。對(duì)這些差異蛋白進(jìn)行功能分析，基于分子功能分12類，基于生物過(guò)程分22類。Pathway分析了502個(gè)差異蛋白，存在223條通路，包括代謝、免疫、信號(hào)、發(fā)育和生殖等各個(gè)方面。其中與卵母細(xì)胞直接相關(guān)的有兩條，分別是卵母細(xì)胞減數(shù)

3、分裂與孕激素介導(dǎo)的卵母細(xì)胞成熟。
　　2、小G蛋白R(shí)as對(duì)褐飛虱生殖力的影響
　　三唑磷是引起褐飛虱再猖獗的典型的殺蟲(chóng)劑，蛋白質(zhì)組學(xué)分析表明它能夠引起褐飛虱脂肪體中Ras的表達(dá)量發(fā)生顯著變化。這里利用飼喂法進(jìn)行RNAi，敲除褐飛虱體內(nèi)的NlRas基因，來(lái)觀察生殖力的變化。與對(duì)照相比，經(jīng)三唑磷處理的褐飛虱NlRas基因相對(duì)表達(dá)量上調(diào)78.64％，產(chǎn)卵量顯著增加41.29％，卵巢和脂肪體的蛋白質(zhì)含量分別高于對(duì)照54.78％和12

4、.77％，卵巢和脂肪體的可溶性糖含量分別顯著高于對(duì)照47.40％和94.12％。三唑磷處理的褐飛虱RNAi后，NlRas基因表達(dá)量無(wú)顯著差異。敲除NlRas對(duì)褐飛虱的產(chǎn)卵量沒(méi)有顯著影響;卵巢蛋白質(zhì)含量分別比對(duì)照和Gfp處理降低36.71％和20.24％;脂肪體蛋白質(zhì)含量分別低21.79％和24.41％。敲除NlRas對(duì)褐飛虱卵巢的可溶性糖含量沒(méi)有顯著影響，卻對(duì)脂肪體的可溶性糖含量有顯著影響。敲除后脂肪體的可溶性糖含量顯著低于三唑磷處理，

5、減少了23.03％。
　　3、依賴cAMP的蛋白激酶1(Pka)對(duì)褐飛虱生殖力的影響
　　Pka可以調(diào)控卵泡細(xì)胞對(duì)卵黃蛋白原的攝取。蛋白質(zhì)組學(xué)研究表明茚蟲(chóng)威處理后褐飛虱脂肪體內(nèi)Pka含量下降。本實(shí)驗(yàn)利用飼喂法進(jìn)行RNAi，敲除褐飛虱體內(nèi)的NlPka基因，來(lái)研究生殖力的變化。茚蟲(chóng)威處理的褐飛虱雌成蟲(chóng)NlPka相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照，下調(diào)55.67％;產(chǎn)卵量無(wú)顯著差異。藥劑處理不顯著影響卵巢的蛋白質(zhì)含量但對(duì)脂肪體的蛋白質(zhì)含量有顯

6、著影響，藥劑處理的脂肪體蛋白質(zhì)含量顯著低于對(duì)照31.41％。藥劑處理后褐飛虱卵巢的可溶性糖含量顯著低于對(duì)照32.76％，但對(duì)脂肪體的可溶性糖含量沒(méi)有顯著影響。RNAi后褐飛虱雌成蟲(chóng)的NlPka相對(duì)表達(dá)量顯著低于飼喂dsGfp處理組和對(duì)照組，分別下調(diào)51.60％和50.67％;產(chǎn)卵量分別比dsGfp和對(duì)照處理下降26.21％和27.14％。敲除NlPka對(duì)卵巢的蛋白質(zhì)含量沒(méi)有顯著影響，但脂肪體的蛋白質(zhì)含量分別低于對(duì)照和dsGfp35.54