系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血NKT細(xì)胞的初步研究.pdf

1、第一部分：外周血Va24 Vβ11NKT細(xì)胞與SLE發(fā)病的關(guān)系 目的：檢測SLE患者外周血Va24 Vβ11NKT細(xì)胞的數(shù)量，探討其與SLE發(fā)病的關(guān)系。方法：運用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測SLE患者外周血單個核細(xì)胞（PBMC）中Va24Vβ11NKT細(xì)胞的百分比數(shù)量。隨機(jī)選擇仁濟(jì)醫(yī)院風(fēng)濕科門診SLE患者10例，診斷均符合1997年美國風(fēng)濕病協(xié)會（ARA）制定的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)，患者為初發(fā)病例或穩(wěn)定后再復(fù)發(fā)患者,患者抽血時激素平均劑量為13

2、.5±10mg。正常人10例作對照。所有流式結(jié)果都由Cellquest軟件分析。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行數(shù)理統(tǒng)計。結(jié)果:健康對照組PBMC中NKT細(xì)胞的數(shù)量為0.20±0.06％,SLE患者為0.039±0.023％,與健康對照組相比，SLE患者PBMC中NKT細(xì)胞數(shù)量明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：SLE患者外周血NKT細(xì)胞數(shù)量減少，提示NKT細(xì)胞可能參與了SLE的發(fā)病。 第二部分：SLE患者PBMC中CD1d分子

3、的表達(dá) 目的：探討CD1d分子在SLE患者與健康人PBMC中的表達(dá)情況是否存在差異。方法：運用流式細(xì)胞儀檢測SLE患者PBMC中CD1d分子的總體表達(dá)，然后運用四色熒光標(biāo)記法檢測CD1d分子在單核細(xì)胞，B細(xì)胞及T細(xì)胞中的表達(dá)情況，所有結(jié)果用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行數(shù)理統(tǒng)計。結(jié)果：SLE患者組PBMC中CD1d分子的表達(dá)為11.7±4％，健康對照組CD1d的表達(dá)為6.9±2.4％。SLE患者PBMC 中CD1d 分子的總體表

4、達(dá)明顯增高，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義。SLE患者CD1d分子主要表達(dá)在單核細(xì)胞上，部分表達(dá)在B細(xì)胞上，在T細(xì)胞上幾乎不表達(dá)。SLE患者組CD1d分子在單核細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞上的表達(dá)分別為73.81±20.9％、15.99±6.4％，0.39±0.26％，健康對照組則分別為37.3±23.11％, 34.8±14.70％, 5.35±7.40％。SLE患者在單核細(xì)胞上的表達(dá)明顯高于正常對照組，在B、T細(xì)胞上的表達(dá)則低于正常對照組，其差異均有統(tǒng)

5、計學(xué)意義。結(jié)論：CD1d分子在SLE患者PBMC中的總體表達(dá)較健康對照組增高，尤其是在單核細(xì)胞上的表達(dá)明顯高于正常對照組。提示SLE患者NKT細(xì)胞數(shù)量下降并非由CD1d分子表達(dá)缺陷所致。 第三部分α－Galcer刺激SLE患者PBMC后NKT細(xì)胞的增殖 目的：探討經(jīng)脂類物質(zhì)α－Galcer刺激PBMC后SLE患者NKT細(xì)胞的增殖情況。方法：無菌操作下取患者新鮮靜脈抗凝血8ml,用Ficoll/密度梯度法離心分離PBMC，

6、以1×106cells/ml懸于10％FBS-1640完全培養(yǎng)液中培養(yǎng)。于第0天，加入α－GalCer 200ng/ml；于第4天補(bǔ)充α－GalCer 200ng/ml，IL-2 20U/ml，7天后觀察細(xì)胞狀態(tài)。將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至流式細(xì)胞儀專用試管，加Vα24Vβ11單抗蔽光孵育30分鐘，洗去多余熒光后上機(jī)檢測Vα24Vβ11NKT細(xì)胞的表達(dá)。結(jié)果：經(jīng)α－GalCer 刺激后，SLE患者（N=15）外周血Vα24Vβ11NKT細(xì)胞數(shù)為0.0

7、65±0.03％，與刺激前（0.039± 0.023％）相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。經(jīng)α－GalCer 刺激后，正常對照組（N=15）Vα24Vβ11NKT細(xì)胞數(shù)為4.52±5.11％，與刺激前(0.20±0.06％)相比較，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。刺激前與刺激后，SLE患者組NKT細(xì)胞的數(shù)量均低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：經(jīng)α－Galcer刺激后，SLE患者PBMC中NKT細(xì)胞無增殖，提示SLE患者NKT細(xì)胞的功能可能存在異常。