鼻息肉患者Treg-Th17細胞表達與TGF-β1相關(guān)性及鼻用激素干預(yù)的研究.pdf

1、鼻息肉病(nasal polyposis，NP)是鼻腔與多個鼻竇黏膜均受累的慢性炎性病變，在上氣道炎癥性疾病中屬于常見病。流行病學(xué)調(diào)查表明，NP在全球的發(fā)病率已達2～4％。雖然NP的診療水平已得到了較大的提高，但是NP的治療效果仍然不能令患者完全滿意，復(fù)發(fā)率也較高。因此，給人們的身體健康和生活質(zhì)量帶來嚴重的負面影響，也給社會造成巨大的經(jīng)濟負擔。在過去的數(shù)十年間，研究人員對NP的病因病理機制開展了廣泛而深入的研究。目前認為，NP黏膜的慢性

2、炎性反應(yīng)是由諸如感染、炎癥以及解剖變異等多個因素共同作用下所導(dǎo)致的大量炎性細胞浸潤的結(jié)果，其中，Treg/Th17細胞之間的不平衡狀態(tài)是造成國人NP發(fā)生發(fā)展的重要因素。
　　轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1是一種對生物發(fā)育代謝具有重要功能的細胞因子，在調(diào)節(jié)人體免疫應(yīng)答以及組織重塑中均發(fā)揮了關(guān)鍵作用。研究表明，TGF-β1能夠刺激STAT3信號，使后者活性得到顯著強化，執(zhí)行誘導(dǎo)na(i)ve CD4+T細胞向Th17細胞分化的功能，并且

3、促進IL-17A等Th17細胞效應(yīng)分子的分泌。同時，TGF-β1自身也是誘導(dǎo)na(i)ve CD4+T細胞向Treg細胞分化，維持Treg細胞功能的重要因子。TGF-β1也是促進多種細胞外基質(zhì)(ECM)成分分泌的關(guān)鍵調(diào)控因子，與ECM代謝密切相關(guān)，在黏膜損傷修復(fù)過程中發(fā)揮了重要作用。但是，目前我們對于TGF-β1在NP中發(fā)揮何種功能尚未徹底了解。
　　本實驗試圖通過分析TGF-β1及其下游信號蛋白在NP中的表達情況，以及與Th17

4、/Treg細胞的相關(guān)性分析進一步明確TGF-β1在NP中的作用及可能的機制。同時分析鼻內(nèi)激素(intranasal steroids，INS)對TGF-β1及其下游相關(guān)分子表達的影響，進一步豐富INS治療NP的實驗及理論依據(jù)。
　　第一部分、鼻息肉組織中TGF-β1與Th17/Treg細胞的相關(guān)性研究
　　目的:通過檢測NP組織中TGF-β1、Foxp3和RORc的表達，以及NP患者外周血中Treg和Th17細胞的數(shù)量，分析

5、TGF-β1與Th17/Treg細胞的相關(guān)性，觀察TGF-β1在NP中可能發(fā)揮何種調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的作用，為進一步闡明國人NP的發(fā)病機制提供理論依據(jù)。
　　方法:收集30例組織標本(NP組15例;對照組15例)和30例外周血標本(NP組15例;對照組15例)。檢測組織中TGF-β1(ELISA檢測法)及其下游信號蛋白p-Smad2(IHC及WB檢測法)含量。采用RT-PCR檢測組織中Foxp3與RORc的表達。采用流式細胞術(shù)檢測外周血

6、中Th17與Treg細胞的數(shù)量。
　　結(jié)果:NP組TGF-β1及其下游信號蛋白p-Smad2含量較對照組降低。NP中Foxp3表達與外周血中的Treg細胞數(shù)量較對照組下降，而RORc水平與Th17細胞數(shù)量的變化趨勢與之相反。相關(guān)性分析顯示TGF-β1與Treg細胞正相關(guān)，與Th17細胞負相關(guān)。
　　結(jié)論:TGF-β1在NP中可能通過促進Treg細胞的分化發(fā)育在NP中發(fā)揮了抑制炎癥反應(yīng)的作用。由于TGF-β1在NP中含量下降可

7、能是造成Treg細胞功能缺陷的原因之一。
　　第二部分、鼻用激素對NP患者Th17/Treg細胞失衡的調(diào)控機制研究
　　目的:在第一部分實驗基礎(chǔ)上，通過將INS作為干預(yù)手段，觀察INS治療與未予INS治療組的NP患者中TGF-β1的變化情況，進一步闡述TGF-β1及其下游相關(guān)分子在NP發(fā)生發(fā)展中所扮演的角色，增加對于INS治療NP作用機制的認識。
　　方法:INS治療與未予INS治療的NP組織與外周血標本各15例。采用

8、HE染色檢測息肉BM厚度。采用ELISA檢測組織中TGF-β1、IL-10、IL-17A、SOCS3、Smad7蛋白含量，TGF-β1下游信號蛋白p-Smad2與p-STAT3則通過IHC與WB檢測。Foxp3與RORc mRNA通過RT-PCR檢測。采用熒光雙標檢測組織中CD4+RORc+與CD4+Foxp3+細胞的表達。外周血中Th17與Treg細胞表達水平通過流式細胞術(shù)檢測。
　　結(jié)果:治療組TGF-β1及其下游信號蛋白p-

9、Smad2以及SOCS3含量較未治療組升高，同時，IL-10、Foxp3、Treg細胞和BM厚度也在INS治療后出現(xiàn)了增長。與此相反，治療組p-STAT3以及RORc、Th17細胞、IL-17A表達水平較未治療組明顯降低。相關(guān)性分析顯示TGF-β1與Treg細胞正相關(guān)，與Th17細胞負相關(guān)。
　　結(jié)論:TGF-β1是NP炎癥反應(yīng)的負調(diào)節(jié)器。Smad信號可在INS的作用下得到增強，并參與促進Foxp3和Treg細胞在人體的表達。除此