短肢發(fā)育異常胎兒的產(chǎn)前FGFR3基因診斷與表型研究.pdf

1、胎兒短肢發(fā)育異常是一組以長骨縮短為共同特征的骨骼發(fā)育異常疾病群，除少數(shù)是染色體病之外，絕大多數(shù)是體質(zhì)性骨病。 目前短肢發(fā)育異常的產(chǎn)前診斷主要依靠超聲檢查。產(chǎn)前超聲對部分短肢發(fā)育異常具有良好的診斷價值，然而由于后者病種繁多、超聲征象缺乏特異性，超聲往往難于鑒別具體類型從而無法確診。 基因檢測是診斷短肢胎兒的最佳標(biāo)準(zhǔn)。目前已知軟骨發(fā)育不全、致死性發(fā)育不良和軟骨發(fā)育低下都與成纖維細(xì)胞生長因子受體3(FGFR3)基因突變有關(guān)。9

2、9﹪的軟骨發(fā)育不全是由于外顯子10G1138A或G1138C突變。60﹪的致死性發(fā)育不良Ⅰ型是由于外顯子7C742T突變；100﹪的致死性發(fā)育不良II型患者是由于外顯子15A1948G突變。50﹪～70﹪的軟骨發(fā)育低下是由于外顯子13C1620A或C1620G突變。 國外通過FGFR3基因檢測診斷軟骨發(fā)育不全、致死性發(fā)育不良和軟骨發(fā)育低下的方法已成熟，并成功應(yīng)用于產(chǎn)前診斷。我國應(yīng)用FGFR3基因檢測診斷軟骨發(fā)育不全也有較多報道，

3、但至今只有1例妊娠38周經(jīng)臍血FGFR3基因檢測產(chǎn)前診斷軟骨發(fā)育不全的報道。致死性發(fā)育不良和軟骨發(fā)育低下的基因診斷國內(nèi)至今未見報道。 研究目的 1．通過檢測短肢發(fā)育異常胎兒FGFR3基因外顯子10、13、7和115，建立軟骨發(fā)育不全、軟骨發(fā)育低下、致死性發(fā)育不良Ⅰ型和Ⅱ型的產(chǎn)前分子學(xué)診斷方法。 2．對短肢發(fā)育異常胎兒進(jìn)行多學(xué)科評估(超聲影像學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、放射影像學(xué)、組織病理學(xué)等)，初步建立常見短肢發(fā)

4、育異常胎兒超聲篩查與臨床診斷方案。 3．通過回顧性分析妊娠中晚期骨骼發(fā)育正常的流產(chǎn)或引產(chǎn)胎兒X線特點，促進(jìn)短肢發(fā)育異常胎兒X線診斷水平的提高，進(jìn)而為產(chǎn)前超聲診斷提供參考資料。 材料與方法 本研究共募集2004年9月至2007年3月到中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科胎兒醫(yī)學(xué)中心就診的短肢發(fā)育異常單胎胎兒78例，妊娠16～40周。75例短肢胎兒行臍血染色體檢查，3例行羊水染色體檢查。除外產(chǎn)前超聲診斷的8例成骨不全胎兒，余7

5、0例短肢胎兒行臍血FGFR3基因檢測(PCR-限制性片段長度多態(tài)性分析、PCR-DNA測序)，根據(jù)產(chǎn)前超聲診斷結(jié)果選擇合適的外顯子檢測：70例檢測外顯子10，60例檢測外顯子13，10例檢測外顯子7和15。27例短肢引產(chǎn)胎兒以及65例骨骼發(fā)育正常流產(chǎn)或引產(chǎn)胎兒娩出后進(jìn)行全身正側(cè)位X線照片檢查。31例短肢引產(chǎn)胎兒進(jìn)行股骨下段骨軟骨連接部組織病理學(xué)檢查。 結(jié)果 一．染色體畸變組：78例短肢胎兒行臍血或羊水染色體分析，發(fā)現(xiàn)11

6、/78例(14﹪)染色體異常，其中21-三體9例、18-三體1例、鑲嵌體1例。11例染色體畸變胎兒產(chǎn)前檢測FGFR3基因外顯子10和13未見異常。染色體畸變短肢胎兒長骨僅輕度縮短(FL：-1.0 SDs～-4.0SDs；HL：-2.0 SDs～-4.0SDs)，而以骨外異常為主要表現(xiàn)。 二．體質(zhì)性骨病組：67/78例(86﹪)短肢胎兒染色體正常，診斷體質(zhì)性骨病，最后確診30例(45﹪)，涉及8類11種體質(zhì)性骨?。很浌前l(fā)育不全8例

7、，軟骨發(fā)育低下2例，致死性發(fā)育不良Ⅰ型4例，成骨不全8例，短肋一多指綜合征2例、軟骨生成不全Ⅰ型、窒息性胸廓發(fā)育不良、彎腿性發(fā)育不良、脊椎干骺端發(fā)育不良、骨硬化癥和局灶性股骨發(fā)育不良各1例。37例(55﹪)未明確診斷。 1．臍血FGFR3基因檢測：70例短肢胎兒行產(chǎn)前FGFR3基因檢測，檢出14個陽性病例，其中8例外顯子10G1 138A雜合突變，確診軟骨發(fā)育不全；4例外顯子7C742T雜合突變，確診致死性發(fā)育不良；2例外顯子13C16

8、20A雜合突變，確診軟骨發(fā)育低下。外顯子15檢測未見突變。 2．產(chǎn)前超聲檢查： (1)產(chǎn)前超聲診斷軟骨發(fā)育不全、軟骨發(fā)育低下、致死性發(fā)育不良、成骨不全的敏感度分別為：88﹪、100﹪、100﹪、100﹪；特異度分別為78﹪、55﹪、91﹪、100﹪。 (2)就短肢(股骨長小于第5百分位數(shù))出現(xiàn)孕周而言，軟骨生成不全發(fā)病最早(16周)，其次是致死性發(fā)育不良(18周)，再次是軟骨發(fā)育不全和軟骨發(fā)育低下(24周)；就短

9、肢嚴(yán)重程度而言，軟骨生成不全最嚴(yán)重，其次是致死性發(fā)育不良、再次是軟骨發(fā)育不全和軟骨發(fā)育低下。 8例軟骨發(fā)育不全胎兒妊娠28周后股骨長標(biāo)準(zhǔn)差評分介于-4SDs～-8SDs，相對同孕周均值的百分?jǐn)?shù)介于70﹪～92﹪。7/8例(88﹪)羊水過多，2/8例(25﹪)巨顱(頭圍標(biāo)準(zhǔn)差評分大于2SDs)。 3例致死性發(fā)育不良胎兒妊娠18周后股骨長標(biāo)準(zhǔn)差評分小于-8SDs，相對同孕周均值的百分?jǐn)?shù)介于31﹪～52﹪。4/4．例股骨彎曲，

10、3/4例巨顱，1/4例頸后軟組織增厚，1/4例羊水過多。 2例軟骨發(fā)育低下胎兒妊娠24周后股骨長標(biāo)準(zhǔn)差評分介于-2SDs～-5SDs，相對同孕周均值的百分?jǐn)?shù)介于86﹪～88﹪。2例巨顱，1例羊水過多。 1例軟骨生成不全胎兒妊娠16周股骨長標(biāo)準(zhǔn)差評分小于-8SDs，相對同孕周均值的百分?jǐn)?shù)為26﹪。 4例成骨不全Ⅱ型胎兒妊娠19周后股骨長標(biāo)準(zhǔn)差評分小于-8SDs，相對同孕周均值的百分?jǐn)?shù)介于36﹪～59﹪。4/4例多發(fā)

11、長骨彎曲成角；顱骨薄、回聲明顯低于正常，探頭加壓可見胎頭變形；胸廓狹小。1/4例羊水過多。 3．胎兒娩出后X線檢查： (1)正常胎兒骨干細(xì)，干骺端膨大、邊緣光整，腰段椎弓根間距自上而下無明顯增寬，呈“平行軌道”征。 (2)X線定性研究：6例軟骨發(fā)育不全胎兒表現(xiàn)為長骨粗短、干骺端火焰狀、邊緣不光整，方形髂骨，魚嘴狀坐骨切跡。3例致死性發(fā)育不良Ⅰ型胎兒表現(xiàn)為長骨嚴(yán)重短粗、胸廓狹小、椎體扁平、椎間盤間距增寬、“電話接收

12、器”狀股骨和肱骨、干骺端邊緣不光整、魚嘴狀坐骨切跡。1例軟骨生成不全胎兒表現(xiàn)為顱蓋骨和全脊柱未見骨化中心，胸廓狹小，髂骨嚴(yán)重發(fā)育不良，坐骨未骨化，長骨極其短粗。6例成骨不全胎兒表現(xiàn)為多發(fā)長骨骨折伴骨痂形成，全身骨質(zhì)密度減低、皮質(zhì)變薄；其中4例成骨不全Ⅱ型胎兒還可見肢體極其短小、胸廓狹小。 (3)X線定量比較研究：9例軟骨發(fā)育異常胎兒(含6例軟骨發(fā)育不全和3例致死性發(fā)育不良)與65例骨骼發(fā)育正常胎兒坐骨切跡角度比較，兩組均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差分別為

13、67.9°±16.0°和109.0°±10.3°，P=0.000。65例骨骼發(fā)育正常、6例軟骨發(fā)育不全和3例致死性發(fā)育不良三組胎兒的肱骨長/寬、股骨長/寬、第一腰椎(L1)長/高比較有統(tǒng)計學(xué)差異，三組胎兒肱骨和股骨有逐漸短粗的變化趨勢，第一腰椎有逐漸扁平的變化趨勢。 4．引產(chǎn)胎兒病理檢查：7例軟骨發(fā)育不全和3例致死性發(fā)育不良引產(chǎn)胎兒股骨下段骨軟骨連接部軟骨細(xì)胞增殖不足、無正常的柵欄狀軟骨細(xì)胞柱形排列。5例成骨不全引產(chǎn)胎兒股骨骨軟

14、骨連接部光鏡下檢查見骨小粱稀疏、纖細(xì)，排列紊亂；軟骨細(xì)胞呈縱行的柵欄狀排列。 結(jié)論 1．本研究結(jié)合產(chǎn)前超聲，建立了通過胎兒臍血FGFR3基因檢測產(chǎn)前診斷軟骨發(fā)育不全、軟骨發(fā)育低下和致死性發(fā)育不良等短肢發(fā)育異常的實驗室方法。 2．胎兒短肢發(fā)育異常的確診需要進(jìn)行多學(xué)科綜合評估?；驒z測是確診FGFR3基因相關(guān)性短肢發(fā)育異常的金標(biāo)準(zhǔn)；超聲是產(chǎn)前發(fā)現(xiàn)短肢的重要工具，對成骨不全、致死性發(fā)育不良等短肢發(fā)育異常具有很好的診斷價