VNS對戊四氮致癇大鼠血清及海馬CA3區(qū)TNF-α,IL-1β的影響和治療研究.pdf

1、[目的]
　　 采用戊四氮(Pentylenetetrazol，PTZ)致癲癇Sprague-Dawley大鼠模型，探討癲癇發(fā)生發(fā)展過程中SD大鼠血清及海馬CA3區(qū)腦組織中細(xì)胞因子TNF-α，IL-1β的含量變化；并用迷走神經(jīng)刺激(Vagus Nerve Stimulation，VNS)干預(yù)，觀察其對癲癇大鼠血清和海馬CA3區(qū)腦組織中TNF-α，IL-1β含量的影響，以及血清與海馬CA3區(qū)腦組織中TNF-α，IL-1β表達(dá)水平的

2、相關(guān)性。以探討VNS在抗癲癇中是否發(fā)揮了免疫調(diào)節(jié)作用，也為探索其發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的可能途徑提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 [方法]
　　 健康成年雄性SD大鼠60只，先隨機(jī)分為3組，即單純VNS組(n=8+2)、戊四氮造模組(n=42)和空白對照組(n=8)。對戊四氮造模組按50mg/kg·d進(jìn)行腹腔注射PTZ溶液，連續(xù)注射30天，建立SD大鼠癲癇點(diǎn)燃模型，在造模過程中大鼠出現(xiàn)死亡或不符合要求者予以剔除，從戊四氮造模組中隨機(jī)

3、選擇點(diǎn)燃成功的30只大鼠，再隨機(jī)分為3組：PTZ組(n=8+2)、PTZ+VNS組(n=8+2)和假手術(shù)組(n=8+2)。VNS刺激參數(shù)：電壓3.5V、電流1 mA、頻率20Hz、波寬500μs、刺激30s間歇1min、每天刺激130min。VNS干預(yù)4周后麻醉處死全部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，經(jīng)左心室抽取動(dòng)脈血4～5ml，凝固，離心，取上清液，-70℃保存?zhèn)溆?。取血結(jié)束后迅速斷頭取腦，于冰盒上快速分離出左側(cè)海馬，固定包埋以備實(shí)驗(yàn)。ELISA法測定各組

4、大鼠血清。TNF-α，IL-1β的含量，免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠海馬CA3區(qū)腦組織中TNF-α，IL-1β的表達(dá)和分布，利用計(jì)算機(jī)圖象對比分析各組大鼠海馬CA3區(qū)腦組織中TNF-α，IL-1β的表達(dá)水平。
　　 [結(jié)果]
　　 1.癲癇大鼠行為學(xué)觀察：造模SD大鼠均出現(xiàn)不同程度的癲癇發(fā)作，造模成功。
　　 2.ELISA法檢測血清TNF-α的含量：PTZ組血清中TNF-α含量較空白對照組明顯升高(P<0.05)

5、，PTZ+VNS組血清中TNF-α含量較PTZ組明顯降低(P<0.05)，但是仍高于空白對照組(P<0.05)；單純VNS組血清中TNF-α含量略高于空白對照組，兩組之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.603>0.05)；假手術(shù)組血清中TNF-α含量略低于PTZ組，兩組之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.999>0.05)。
　　 3.ELISA法檢測血清IL-1β的含量：PTZ組血清中IL-1β含量較空白對照組明顯升高(P<0.05)

6、，PTZ+VNS組血清中IL-1β含量較PTZ組明顯降低(P<0.05)，較空白對照組略高，但兩者之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.06>0.05)；單純VNS組血清中IL-1β含量略低于空白對照組，兩組之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.982>0.05)；假手術(shù)組血清中IL-1β含量略低于PTZ組，兩組之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.955>0.05)。
　　 4.TNF-α免疫組化染色：取海馬CA3區(qū)進(jìn)行圖象對比分析；PTZ組、

7、假手術(shù)組陽性細(xì)胞表達(dá)均顯著高于空白對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)：PTZ+VNS組陽性細(xì)胞表達(dá)較PTZ組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但是仍高于空白對照組(P<0.05)；單純VNS組中陽性細(xì)胞表達(dá)略低于空白對照組，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=1.000>0.05)；假手術(shù)組陽性細(xì)胞表達(dá)略低于PTZ組，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.995>0.05)。
　　 5.IL-1β免疫組化染色：取海馬CA3區(qū)進(jìn)行圖象

8、對比分析；PTZ組、假手術(shù)組陽性細(xì)胞表達(dá)均顯著高于空白對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；PTZ+VNS組陽性細(xì)胞表達(dá)較PTZ組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但是仍略高于空白對照組(P<0.05)；單純VNS組中陽性細(xì)胞表達(dá)略高于空白對照組，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=1.000>0.05)；假手術(shù)組陽性細(xì)胞表達(dá)略低于PTZ組，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.974>0.05)。
　　 6.血清與海馬CA3區(qū)TNF

9、-α，IL-1β表達(dá)的相關(guān)性分析：大鼠血清中TNF-α與IL-1β表達(dá)水平之間呈顯著正相關(guān)(n=40，r=0.923，P<0.01)；大鼠海馬CA3區(qū)TNF-α與IL-1β表達(dá)水平之間呈顯著正相關(guān)(n=120，r=0.909，P<0.01)；TNF-α在大鼠血清中與海馬CA3區(qū)的表達(dá)水平之間呈顯著正相關(guān)(n=40，r=0.913，P<0.01)；IL-1β在大鼠血清中與海馬CA3區(qū)的表達(dá)水平之間呈顯著正相關(guān)(n=40，r=0.907，P

10、<0.01)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.血清及海馬CA3區(qū)腦組織中TNF-α，IL-1β等細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)促進(jìn)了癲癇的發(fā)生發(fā)展。
　　 2.在與癲癇密切相關(guān)的炎癥反應(yīng)中TNF-α與IL-1β的表達(dá)之間存在相互促進(jìn)活性的關(guān)系。
　　 3.癲癇發(fā)生發(fā)展中可能伴隨著BBB及腦-腦脊液屏障的破壞或通透性改變。
　　 4.VNS對外周和中樞都有免疫調(diào)節(jié)的作用；VNS可能通過同時(shí)減少外周血及中樞致炎細(xì)