高原大鼠嚴(yán)重?zé)齻舆t復(fù)蘇后氧化應(yīng)激對腸上皮細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討高原地區(qū)不同海拔高度大鼠嚴(yán)重?zé)齻舆t復(fù)蘇后氧化應(yīng)激反應(yīng)對腸屏障結(jié)構(gòu)的影響。 方法：將Wistar大鼠132只分為蘭州組(1517m)和高原組(3840 m)，蘭州組包括蘭州即時復(fù)蘇組(LIFR，n=30)、蘭州延遲復(fù)蘇組(LDFR，n=30)、蘭州假傷組(LCG，n=6)，高原組包括高原即時復(fù)蘇組(HIFR，n=30)、高原延遲復(fù)蘇組(HDFR，n=30)、高原假傷組(HCG，n=30)。大鼠背部30％TBSA(總體表

2、面積)Ⅲ度燙傷后，立即或傷后6 h液體復(fù)蘇，分別于傷后6h，12h，24h，48h和72h取材。采用組織病理學(xué)觀察、原位末端標(biāo)記(TUNEL)法、免疫組織化學(xué)染色與圖象分析技術(shù)，在動態(tài)觀察小腸粘膜病理學(xué)變化的基礎(chǔ)上，觀察不同海拔高度嚴(yán)重?zé)齻舆t復(fù)蘇后小腸粘膜中丙二醛(MDA)和總巰基(TSH)變化及凋亡相關(guān)基因bax、bcl-2、HIF-1α蛋白表達(dá)的變化。并檢測了不同海拔高度嚴(yán)重?zé)齻舆t復(fù)蘇后腸上皮細(xì)胞凋亡率(原位末端標(biāo)記法)。探討腸

3、上皮細(xì)胞中的MDA、TSH含量變化及凋亡相關(guān)基因bax、bcl-2、HIF-1α蛋白表達(dá)變化與腸上皮細(xì)胞凋亡的關(guān)系。 結(jié)果：1.隨著海拔高度的增加，HE染色可見大鼠燒傷后小腸粘膜出現(xiàn)腫脹且有炎性細(xì)胞浸潤，小腸粘膜結(jié)構(gòu)紊亂，腸粘膜內(nèi)空泡樣結(jié)構(gòu)逐漸增多，并可見凋亡小體，HDFR組較LDFR組變化明顯。2.大鼠燒傷后小腸粘膜中MDA含量顯示高原實(shí)驗(yàn)組高于蘭州實(shí)驗(yàn)組(P<0.05)；兩個高度大鼠燒傷后小腸粘膜中MDA含量示延遲復(fù)蘇組(D

4、FR)高于即時復(fù)蘇組(IFR)(P<0.05)；在傷后12h，小腸粘膜MDA含量最高(P<0.01)；傷后實(shí)驗(yàn)各組MDA含量均高于假傷組(CG)(P<0.01)；這與小腸粘膜中TSH含量變化相反；3.腸上皮細(xì)胞中bax、bcl-2、HIF-1α蛋白表達(dá)檢測陽性染色均位于細(xì)胞核或胞漿， bax、HIF-1α蛋白表達(dá)強(qiáng)度實(shí)驗(yàn)組高于對照組，隨海拔梯度上升大鼠傷后bax、HIF-1α蛋白表達(dá)增強(qiáng)，各海拔高度DFR組表達(dá)強(qiáng)度高于IFR組(P<0.

5、05)，在海拔3840m DFR組傷后12h表達(dá)最強(qiáng)；bcl-2基因表達(dá)高原地區(qū)致傷動物均為陰性結(jié)果，蘭州地區(qū)傷后6h，12h為陰性表達(dá)，其他情況為弱陽性表達(dá)。4.TUNEL法檢測凋亡細(xì)胞顯示凋亡細(xì)胞陽性染色主要位于細(xì)胞核，隨海拔梯度上升大鼠傷后小腸上皮細(xì)胞凋亡率增高，各海拔高度DFR組腸上皮細(xì)胞凋亡率高于IFR組(P<0.05)，在海拔3840m DFR組12h表達(dá)最高；5.HDFR組MDA含量與 bax表達(dá)強(qiáng)度的變化呈顯著正相關(guān)(r

6、=0.938，P<0.05)、與細(xì)胞凋亡光密度值呈顯著正相關(guān)(r=0.899，P<0.05)；TSH含量與與HDFR組bax表達(dá)強(qiáng)度的變化呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.934，P<0.05)、與細(xì)胞凋亡光密度值呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.948，P<0.05)。 結(jié)論：1.隨海拔高度的增加，高原組大鼠嚴(yán)重?zé)齻舆t復(fù)蘇后腸粘膜病理學(xué)損傷較蘭州組明顯加重；2.氧化應(yīng)激反應(yīng)是高海拔地區(qū)大鼠嚴(yán)重?zé)齻舆t復(fù)蘇腸屏障損傷的重要因素；3.bax和bcl