血小板裂解液對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外成軟骨分化的影響.pdf

1、目的:探討血小板裂解液(plateletlyaste,PL)在體外定向誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(humanumbilicalcordderivedmesenchymalstemcells,hUCMSCs)分化成軟骨細(xì)胞中的作用。
　　 方法:采用膠原酶消化法分離hUCMSCs,體外培養(yǎng)擴(kuò)增,流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞表型鑒定。根據(jù)加入誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分不同將實(shí)驗(yàn)分為以下3組:A組為H-DMEM培養(yǎng)基、10%FBS及10%PL,B組為H-DME

2、M培養(yǎng)基、10%FBS、10ng/mLTGF-β1、1×10-7mol/L地塞米松、50ug/mL維生素C及1%胰島素鐵硒傳遞蛋白(Insulin-Transferrin-Selenium,ITS),C組為H-DMEM培養(yǎng)基、10%FBS、10ng/mLTGF-β1、1×10-7mol/L地塞米松、50ug/mL維生素C、1%ITS及10%PL。誘導(dǎo)培養(yǎng)2周,甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)各組軟骨細(xì)胞基質(zhì)的分泌,免疫熒光檢測(cè)軟骨特異性Ⅱ型膠原表達(dá),半

3、定量RT-PCR檢測(cè)蛋白聚糖(Aggrecan)和Ⅱ型膠原表達(dá)。
　　 結(jié)果:分離得到的hUCMSCs不表達(dá)造血細(xì)胞的表面標(biāo)記CD45、CD34和HLA-DR,而表達(dá)黏附分子和MSCs表面標(biāo)記CD44、CD105和CD146。甲苯胺藍(lán)染色和Ⅱ型膠原免疫熒光染色示C組呈陽(yáng)性,B組呈弱陽(yáng)性,而A組均呈陰性。半定量RT-PCR檢測(cè)示Aggrecan和Ⅱ型膠原在B、C組中均有表達(dá),而A組中未見表達(dá);B、C組的AggrecanmRNA和Ⅱ