NAFLD大鼠肝臟基因表達譜的改變及二甲雙胍的干預作用.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver diseases,NAFLD)是一種常見的慢性肝病,是引起不明原因轉氨酶升高和隱源性肝硬化的主要原因.該實驗即探討了NAFLD發(fā)生和發(fā)展過程中肝臟基因的動態(tài)改變情況,并觀察二甲雙胍干預對肝臟基因表達的影響,以進一步明確其治療機制.第一部分芯片技術研究NAFLD大鼠肝臟基因表達譜的動態(tài)變化;目的:了解高脂飲食NAFLD大鼠肝臟基因的異常表達情況,著重探討代謝、炎癥和纖維

2、化相關基因的變化.方法:復制NAFLD大鼠模型,在實驗第4、8、12、16、24周分批處死大鼠,觀察肝臟組織學改變;并取肝組織進行總RNA提取、雙鏈cDNA合成、cRNA轉錄和純化,應用含有15,650條基因的大鼠U230A芯片進行檢測.結論:高脂飲食NAFLD大鼠肝臟基因隨著時間的進展呈動態(tài)性改變,相繼表現(xiàn)為成脂基因、代謝酶基因,炎癥和凋亡相關基因,以及纖維化相關基因的表達上調,導致NAFLD的病理學發(fā)生相應的改變.第二部分成脂相關基

3、因在NAFLD大鼠肝臟中的表達;目的:探討固醇調節(jié)元件結合蛋白1c(sterol regulatory element-binding protein1c,SREBP-1c)及其靶基因脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、成脂相關基因adipsin、resistin和瘦素受體(leptin receptor long form,OB-Rb)在高脂飲食NAFLD大鼠肝臟中的表達及其作用,并分析瘦素及其受體與SRE

4、BP-1c和肝組織學改變的關系.方法:RT-PCR檢測SREBP-1c、FAS、adipsin、resistin和OB-Rb在肝臟中的表達,ELISA法檢測血清瘦素的變化情況.結論:高脂飲食NAFLD大鼠肝臟SREBP-1c、FAS、adipsin、resistin mRNA的表達升高,提示NAFLD大鼠肝臟可能發(fā)生成脂性改變.血清瘦素水平上升,而肝細胞OB-Rb表達下降,提示NAFLD大鼠存在瘦素抵抗,并可能通過誘導成脂基因的表達,加

5、重肝臟的異位脂肪沉積.第三部分二甲雙胍對NAFLD大鼠肝臟成脂基因表達的影響;目的:探討二甲雙胍對NAFLD大鼠肝臟成脂基因表達的影響.方法:雄性SD大鼠隨機分為3組.正常組6只,模型組和治療組各12只.治療組在給予高脂飲食的同時,在實驗開始第4周起按250mg/kg/d加入二甲雙胍干預,于第24周時處死.觀察肝組織學改變,進行基因芯片檢測,并觀察肝臟SREBP-1c、FAS、adipsin、resistin和OB-Rb mRNA的表達