絲素蛋白多孔支架聯(lián)合硫酸軟骨素酶ABC治療大鼠脊髓損傷.pdf

1、目的:探討絲素蛋白多孔支架(Porous Silk Fibroin Scaffolds,PSFSs)聯(lián)合硫酸軟骨素酶ABC(chondroitinase ABC,ChABC)移植對(duì)脊髓損傷大鼠神經(jīng)再生和功能恢復(fù)的作用。
　　方法:采用冷凍干燥法制備PSFSs,掃描電鏡觀察結(jié)構(gòu)。將96只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(A組)、PSFSs移植組(B組)、ChABC移植組(C組)和PSFSs+ChABC移植組(D組),每組24只。4組均采用標(biāo)準(zhǔn)

2、的脊髓全橫斷模型制備方法,切除2mm脊髓組織。A組作為對(duì)照,B、C、D組分別移植PSFSs、ChABC和PSFSs+ChABC。術(shù)后1、2、4周,采用BBB評(píng)分法檢測(cè)大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況;取出相應(yīng)脊髓組織行HE染色和神經(jīng)絲蛋白-200(neurofilament-200,NF-200)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43(growth associated

3、 protein43, GAP-43)免疫組織化學(xué)染色,以及GAP-43免疫熒光染色,軟件分析各組NF-200、GAP-43陽性染色的積分吸光度(IA)值和 GFAP陽性染色面積,并在術(shù)后4周對(duì)NF-200、GFAP、GAP-43行免疫印跡分析(western blot analysis),定量和定性評(píng)價(jià)神經(jīng)纖維束修復(fù)、再生及膠質(zhì)瘢痕形成情況。
　　結(jié)果:掃描電鏡觀察見 PSFSs內(nèi)部呈多孔的海綿狀結(jié)構(gòu),內(nèi)部孔隙較多,分布均勻。術(shù)

4、后各組各時(shí)間點(diǎn)BBB評(píng)分結(jié)果示,術(shù)后2周 A組 BBB評(píng)分低于B、C、D組(P<0.05),術(shù)后4周 D組BBB評(píng)分優(yōu)于B、C組(P<0.05),B、C組 BBB評(píng)分優(yōu)于A組(P<0.05)。HE染色示,術(shù)后4周時(shí)各組均有空洞形成和神經(jīng)元壞死,其程度在B、C、D組低于A組。術(shù)后4周 B、C、D組 NF-200和GAP-43陽性染色的IA值高于A組(P<0.05),D組高于 B、C組(P<0.05)。術(shù)后2、4周D組GFAP染色陽性面積小

5、于A、B、C組(P<0.05),B、C組面積小于A組(P<0.05)。術(shù)后4周 GAP-43免疫熒光染色示B、C、D組的GAP-43熒光強(qiáng)度高于A組,且以D組為著;D組損傷區(qū)內(nèi)GAP-43陽性的神經(jīng)纖維多于其他3組。免疫印跡分析表明對(duì)照組NF-200、GFAP、GAP-43表達(dá)量與各移植組之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組 GFAP表達(dá)明顯強(qiáng)于各治療組,而各治療組GAP-43、NF-200表達(dá)明顯強(qiáng)于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)