水通道蛋白8對(duì)膿毒癥大鼠肝細(xì)胞線粒體形態(tài)的影響.pdf

1、膿毒癥(sepsis) 是指感染引起的全身性炎癥反應(yīng)綜合征(systemic infla-mmatory response syndrome, SIRS),是危重癥患者病死的主要原因之一,進(jìn)一步發(fā)展可引起重癥膿毒癥(severe sepsis)膿毒癥休克(septic shock)和多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunc-tion syndrome, MODS)?肝臟是膿毒癥狀態(tài)下最易受累的器官之一,肝功能不

2、全是膿毒癥發(fā)展為多器官功能衰竭(multiple organ failure,MOF)的早期表現(xiàn)之一?膿毒癥的發(fā)病機(jī)制尚不十分明確,可能的發(fā)病機(jī)制包括：炎癥因子風(fēng)暴?凝血系統(tǒng)紊亂和微循環(huán)障礙?免疫抑制、線粒體功能障礙和機(jī)體氧供與氧耗失衡等?肝細(xì)胞線粒體是機(jī)體營養(yǎng)物質(zhì)和能量代謝中心,線粒體功能障礙在膿毒癥狀態(tài)下,尤其是膿毒癥休克患者的病情發(fā)展中起著很重要的作用?水通道蛋白8(aquaporin-8,AQP8)是在肝細(xì)胞線粒體內(nèi)膜(inne

3、r mitochondria membrane,IMM)上表達(dá)的一種水分子通道,是具有高度選擇性和高效轉(zhuǎn)運(yùn)水分子的特異孔道,對(duì)維持肝細(xì)胞線粒體的結(jié)構(gòu)和功能具有較大的影響?本研究使用盲腸結(jié)扎穿孔法制備膿毒癥大鼠模型,旨在探討膿毒癥造成肝細(xì)胞線粒體形態(tài)的變化,以及線粒體內(nèi)膜AQP8在膿毒癥介導(dǎo)的肝損傷中的所發(fā)揮的作用?
　　目的：
　　研究膿毒癥狀態(tài)下水通道蛋白8(AQP8)在肝細(xì)胞線粒體膜上表達(dá)程度對(duì)線粒體形態(tài)變化的影響,為進(jìn)

4、一步探尋改善線粒體膜AQP8蛋白表達(dá)的方法,以期能起到對(duì)膿毒癥介導(dǎo)肝損傷的保護(hù)作用?
　　方法：
　　24只SD大鼠隨機(jī)分為2組:對(duì)照組和膿毒癥組,每組12只?采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)制備膿毒癥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,對(duì)照組進(jìn)行假手術(shù),完成除盲腸結(jié)扎穿孔外的實(shí)驗(yàn)過程?觀察兩組動(dòng)物的體溫?呼吸頻率?心率變化和對(duì)外界刺激的反應(yīng),達(dá)到膿毒癥診斷標(biāo)準(zhǔn)后繼續(xù)觀察1h,然后在麻醉后用斷頭法處死實(shí)驗(yàn)大鼠;取出大鼠肝臟,一部分新鮮肝臟用于制作電鏡標(biāo)本,進(jìn)行

5、超微結(jié)構(gòu)觀察,另一部分肝臟用于提取線粒體,后采用Western-blotting法測(cè)定線粒體AQP8蛋白表達(dá)水平,并用RT-PCR法檢測(cè)肝細(xì)胞線粒體AQP8mRNA水平?采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析?計(jì)量資料采用單因素方差分析(one-wayANOVA)?
　　結(jié)果：
　　1.線粒體超微結(jié)構(gòu)變化
　　對(duì)照組肝細(xì)胞膜邊界清楚?完整,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體數(shù)目較多且形態(tài)正常?而膿毒癥組肝細(xì)胞線粒體顯著腫脹?嵴變寬?短,并出

6、現(xiàn)線粒體膜破裂,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也出現(xiàn)擴(kuò)張?斷裂及空泡化?
　　2.肝細(xì)胞線粒體AQP8蛋白表達(dá)
　　以prohibitin作為內(nèi)參,用AQP8/prohibitin表示AQP8蛋白相對(duì)表達(dá)水平,將對(duì)照組的AQP8蛋白相對(duì)表達(dá)水平設(shè)為1,計(jì)算出膿毒癥組(n=12)AQP8蛋白相對(duì)表達(dá)水平為0.61±0.08,較對(duì)照組減少平均約39％,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=62.71,P<0.01)?
　　3肝細(xì)胞線粒體AQP8mRNA的表達(dá)

7、
　　以β-actin作為內(nèi)參,AQP8/β-actin表示AQP8mRNA相對(duì)表達(dá)量,將對(duì)照組的AQP8mRNA相對(duì)表達(dá)水平設(shè)為1,膿毒癥組AQP8mRNA相對(duì)表達(dá)量為1.59±0.24;AQP8mRNA表達(dá)較對(duì)照組增加平均約59%,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=67.85,P<0.01)?
　　結(jié)論：
　　1.采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)可以成功制備大鼠膿毒癥模型;
　　2.膿毒癥可以介導(dǎo)急性肝損傷,肝細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)發(fā)