辛伐他汀對(duì)膿毒癥早期大鼠肝臟損害的影響.pdf

1、目的：
　　膿毒癥(sepsis)是感染病原體與宿主免疫系統(tǒng)、炎癥反應(yīng)、凝血反應(yīng)之間相互作用，造成機(jī)體器官功能損害的復(fù)雜臨床綜合癥，是創(chuàng)傷、燒傷、休克、感染等臨床急危重癥患者的嚴(yán)重并發(fā)癥。膿毒癥進(jìn)一步發(fā)展可引起嚴(yán)重膿毒癥(severe sepsis)、膿毒性休克(septic shock)、多器官功能障礙綜合征(Multiple organ dysfunction
　　syndrome，MODS)，也是引起嬰幼兒死亡的主要原

2、因之一。近年眾多研究表明，辛伐他汀除降低血脂作用外，還具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫、減輕氧化應(yīng)激損傷、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、抗凝和改善血脂代謝作用。辛伐他汀的這種多效作用功能可能對(duì)膿毒癥患者臟器具有保護(hù)作用，對(duì)防止膿毒癥進(jìn)一步發(fā)展為MODS有著重要的意義。此外，肝臟是機(jī)體進(jìn)行物質(zhì)和能量代謝的重要器官。在膿毒癥早期，肝臟作為一個(gè)重要的靶器官成為遭受內(nèi)毒素攻擊的首要器官，其功能、結(jié)構(gòu)和代謝的變化決定了病情的發(fā)展。本課題研究辛伐他汀對(duì)膿毒癥早期大鼠肝臟功能

3、和病理學(xué)改變的影響，并通過觀察炎癥因子（TNF-a、IL-6、IL-10）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、血脂等指標(biāo)的變化，探討辛伐他汀對(duì)膿毒癥早期大鼠肝臟是否具有保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制，為膿毒癥患者早期使用辛伐他汀治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.建立動(dòng)物模型及分組
　　膿毒癥模型采用腹腔注射10mg/kg內(nèi)毒素(LPS)建立。56只無特定病原體(Specific Pathogen

4、 Free，SPF)級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分成3組：生理鹽水對(duì)照組（n=8只）：每天通過灌胃針給予生理鹽水1ml口服1次。在第7天大鼠口服生理鹽水后，立即腹腔注射等容量生理鹽水，于6小時(shí)采集標(biāo)本后處死。前期試驗(yàn)已證明，對(duì)照組大鼠腹腔注射生理鹽水后，不同時(shí)點(diǎn)各對(duì)照組大鼠之間血液各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。LPS+生理鹽水組（n=24只）：每天通過灌胃針給予生理鹽水1ml口服1次。在第7天大鼠口服生理鹽水后，立即腹腔注射LPS10mg/kg，

5、于6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)3個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集標(biāo)本后處死，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只(n=8只)；LPS+辛伐他汀組（n=24只）：每天通過灌胃針給予辛伐他汀20mg/kg口服1次，在第7天大鼠口服辛伐他汀后，立即腹腔注射LPS10mg/kg，于6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)3個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集標(biāo)本后處死，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只(n=8只)。
　　2.檢測(cè)指標(biāo)及方法
　　2.1大鼠一般情況
　　觀察正常對(duì)照大鼠和注射LPS后3h、6h、12h、24h各

6、組大鼠的精神狀態(tài)，有無發(fā)熱、豎毛、腹瀉及皮膚黏膜出血情況，并測(cè)量肛溫、心率和呼吸頻率。
　　2.2大鼠肝功能指標(biāo)
　　肝功能指標(biāo)：運(yùn)用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組大鼠血清ALT和AST水平
　　2.3大鼠炎癥反應(yīng)指標(biāo)
　　運(yùn)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA法)檢測(cè)生理鹽水對(duì)照組大鼠和注射LPS后6h、12h、24h各組大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-10水平。
　　2.4大鼠肝臟氧化應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)<

7、br>　　運(yùn)用硫代巴比妥酸(TBA)法檢測(cè)各組大鼠肝組織臟MDA含量；運(yùn)用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定各組大鼠肝臟組織SOD活性。
　　2.5大鼠肝臟組織一氧化氮含量
　　運(yùn)用硝酸還原酶法測(cè)定各組大鼠肝臟組織NO含量。
　　2.6大鼠血脂代謝指標(biāo)
　　運(yùn)用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組大鼠血清TC、TG、HDL和LDL水平。
　　2.7大鼠肝臟組織病理切片觀察
　　3.統(tǒng)計(jì)方法
　　獲得的數(shù)據(jù)用SPSS l7.

8、0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，結(jié)果用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(sx±)表示；多組間比較采用單因素方差分析，兩組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析；P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.動(dòng)物一般情況
　　LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組均出現(xiàn)膿毒癥相關(guān)癥狀，包括精神萎靡，發(fā)熱，豎毛，腹瀉，呼吸、心率顯著升高。
　　2.大鼠肝功能指標(biāo)
　　各組大鼠血清ALT和AST水平的比較

9、r>　　與生理鹽水對(duì)照相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組腹腔注射LPS后6h、12h、24h血清ALT、AST水平均明顯升高(P＜0.05)；與24小時(shí)LPS+生理鹽水組相比，24小時(shí)LPS+辛伐他汀組血清ALT、AST明顯降低(P＜0.05)；6h、12h LPS+辛伐他汀組大鼠血清ALT、AST水平與6h、12h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異性(P＞0.05)。
　　3.大鼠炎癥反應(yīng)指標(biāo)
　　3.1各組大鼠

10、血清TNF-α水平的比較
　　與生理鹽水對(duì)照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組腹腔注射LPS后6h、12h、24h血清TNF-α水平均明顯升高(P＜0.05)，以6小時(shí)組血清TNF-α水平升高最為
　　顯著；與6h LPS+生理鹽水組相比，6h LPS+辛伐他汀組血清TNF-α水平明顯降低(P＜0.05)；12h、24h LPS+辛伐他汀組大鼠血清TNF-α水平與12h、24h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(

11、P＞0.05)。
　　3.2各組大鼠血清IL-6水平的比較
　　與生理鹽水對(duì)照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組腹腔注射LPS后6h、12h、24h血清IL-6水平均明顯升高(P＜0.05)，以6小時(shí)組血清IL-6水平升高最為顯著；與6h、12h LPS+生理鹽水組相比，6h、12h LPS+辛伐他汀組血清IL-6水平明顯降低(P＜0.05)；24h LPS+辛伐他汀組血清IL-6水平與24h LPS+生理鹽水組

12、相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　3.3各組大鼠血清IL-10水平的比較
　　與生理鹽水對(duì)照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組腹腔注射LPS后6h、12h、24h血清IL-10水平均明顯升高(P＜0.05)，以6小時(shí)組血清IL-10水平升高最為顯著；與6h、12h LPS+生理鹽水組相比，6h、12h LPS+辛伐他汀組血清IL-10水平明顯升高(P＜0.05)；24h LPS+辛伐他汀組血清IL-10水平與

13、24h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　4.大鼠肝臟氧化應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)
　　4.1各組大鼠肝臟組織MDA含量的比較
　　與生理鹽水對(duì)照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組腹腔注射LPS后6h、12h肝臟組織MDA含量明顯升高(P＜0.05)，24h時(shí)無明顯差異(P＞0.05)；與6h、12h
　　LPS+生理鹽水組相比，6h、12h LPS+辛伐他汀組肝臟組織MDA含量明顯降低(P

14、＜0.05)；24h LPS+辛伐他汀肝臟組織MDA含量與24h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　4.2各組大鼠肝臟組織SOD活性的比較
　　與生理鹽水對(duì)照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組腹腔注射LPS后6h、12h、24h肝臟組織SOD活性明顯降低(P＜0.05)，6h、12h、24h LPS+辛伐他汀組大鼠肝臟組織SOD活性與6h、12h、24h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P

15、＞0.05)。
　　5.大鼠肝臟組織NO含量
　　與生理鹽水對(duì)照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組大鼠腹腔注射LPS后6h、12h肝臟組織NO含量明顯升高(P＜0.05)，24h時(shí)無明顯差異(P＞0.05)；6h、12h、24h LPS+辛伐他汀組大鼠肝臟組織NO含量與6h、12h、24h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　6.大鼠血脂代謝指標(biāo)
　　與生理鹽水對(duì)照組相比，12h、

16、24h LPS+生理鹽水組和12 LPS+辛伐他汀組血清TC水平明顯升高(P＜0.05)；與24h LPS+生理鹽水組相比，24h LPS+辛伐他汀組血清TC水平明顯降低(P＜0.05)；6h、12h LPS+辛伐他汀組大鼠血清TC水平與6h、12h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　與生理鹽水對(duì)照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組腹腔注射LPS后6h、12h、24h血清TG水平明顯升高(P＜0.

17、05)；與6h LPS+生理鹽水組相比，6h LPS+辛伐他汀組血清TG水平明顯降低(P＜0.05)；12h、24h LPS+辛伐他汀組大鼠血清TG水平與12h、24h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　與生理鹽水對(duì)照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組大鼠腹腔注射LPS后6h、12h、24h血清HDL水平無明顯改變(P＞0.05)；與24h LPS+生理鹽水組相比，24h LPS+辛伐他汀組血清H

18、DL水平明顯降低(P＜0.05)；6h、12h LPS+辛伐他汀組大鼠血清HDL水平與6h、12h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　與生理鹽水對(duì)照組相比，12h、24h LPS+生理鹽水組和6h、12 LPS+辛伐他汀組血清LDL水平明顯升高(P＜0.05)；6h、12h、24h LPS+辛伐他汀組大鼠血清LDL水平與6h、12h、24h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　7.肝

19、臟病理切片顯微鏡觀察
　　生理鹽水對(duì)照組肝臟細(xì)胞形態(tài)正常。LPS+生理鹽水6小時(shí)組大鼠肝臟病理切片即出現(xiàn)肝細(xì)胞水腫樣改變，肝索排列紊亂，并可見少量炎癥細(xì)胞侵潤，12小時(shí)組大鼠肝細(xì)胞水腫加重，大量炎癥細(xì)胞侵潤，伴有少量出血，在24小時(shí)組則可觀察到局灶性肝細(xì)胞壞死，而各時(shí)點(diǎn)LPS+辛伐他汀組較LPS+生理鹽水組有改善。
　　8.大鼠各指標(biāo)的相關(guān)性分析
　　大鼠血清ALT、AST水平與血清TNF-α、IL-6、IL-10水平

20、呈正相關(guān)，6小時(shí)與TNF-α相關(guān)系數(shù)分別為0.881(P＜0.05)和0.908(P＜0.05)、與 IL-6相關(guān)系數(shù)分別為0.854(P＜0.05)和0.919(P＜0.05)、與IL-10相關(guān)系數(shù)分別為0.849(P＜0.05)和0.941(P＜0.05)；12小時(shí)與TNF-α相關(guān)系數(shù)分別為0.818(P＜0.05)和0.799(P＜0.05)、與IL-6相關(guān)系數(shù)分別為0.921(P＜0.05)和0.938(P＜0.05)；與IL-

21、10相關(guān)系數(shù)分別為0.895(P＜0.05)和0.927(P＜0.05)；24小時(shí)與TNF-α相關(guān)系數(shù)分別為0.748(P＜0.05)和0.672(P＜0.05)、與IL-6相關(guān)系數(shù)分別為0.775(P＜0.05)和0.852(P＜0.05)、與IL-10相關(guān)系數(shù)分別為0.779(P＜0.05)和0.905(P＜0.05)。
　　大鼠血清ALT、AST水平與肝臟組織MDA含量在6小時(shí)和12小時(shí)呈正相關(guān)，6小時(shí)相關(guān)系數(shù)分別為0.67

22、4(P＜0.05)和0.705(P＜0.05)；12小時(shí)相關(guān)系數(shù)分別為0.570(P＜0.05)和0.620(P＜0.05)；24小時(shí)大鼠血清ALT、AST水平與肝臟組織MDA含量無相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)分別為0.296(P＞0.05)和0.333(P＞0.05)。
　　大鼠血清ALT、AST水平與肝臟組織SOD活性呈負(fù)相關(guān)，6小時(shí)相關(guān)系數(shù)分別為-0.675(P＜0.05)和-0.559(P＜0.05)；12小時(shí)相關(guān)系數(shù)分別為-0.52

23、1(P＜0.05)和-0.446(P＜0.05)；24小時(shí)相關(guān)系數(shù)分別為-0.600(P＜0.05)和-0.562(P＜0.05)。
　　大鼠血清ALT、AST水平與肝臟組織NO含量在6小時(shí)和12小時(shí)呈正相關(guān)，6小時(shí)相關(guān)系數(shù)分別為0.840(P＜0.05)和0.898(P＜0.05)；12小時(shí)相關(guān)系數(shù)分別為0.858(P＜0.05)和0.924(P＜0.05)；24小時(shí)大鼠血清ALT、AST水平與肝臟組織NO含量無相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)