c-Src特異性干擾RNA對胰腺癌PANC-1細胞的影響.pdf

1、蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文cSrc特異性干擾RNA對胰腺癌PANC1細胞的影響姓名：王建新申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：普通外科學(xué)指導(dǎo)教師：李德春20070401eSrc特異性干擾RNA對胰腺癌PANC1細胞的影響中文摘要蛋白的表達。根據(jù)篩選結(jié)果構(gòu)建兩條DNA模板鏈，限制性核酸內(nèi)切酶線性化空質(zhì)粒后，連接酶將插入片斷插入空質(zhì)粒中，通過酶切鑒定及測序確定合成的質(zhì)粒符合要求。使用cSrc特異性干擾RNA質(zhì)粒及陰性對照質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)染PANC1細胞，陽性細胞

2、使用G418篩選，并挑選陽性細胞單克隆，流式細胞儀及熒光顯微鏡檢測轉(zhuǎn)染效率，MTT及流式細胞儀檢測不同組細胞對吉西他濱的敏感性，ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清VEGF的表達，建立裸鼠皮下種植瘤模型，檢測腫瘤組織cSrc及MVD的表達。結(jié)果：①脂質(zhì)體LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染PANC1細胞的轉(zhuǎn)染效率為963％，最有效的siRNA抑制率為861％。②酶切鑒定及測序證實干擾質(zhì)粒成功建立。③cSrc特異性干擾RNA質(zhì)粒pSrcs及陰

3、性對照質(zhì)粒pSRSa，轉(zhuǎn)染PANC1細胞，3418篩選，在pSrcs質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞中磷酸化Akt表達下降。④M1vr及流式細胞儀結(jié)果提示：在pSrcs質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞會增高吉西他濱導(dǎo)致的細胞凋亡。⑤細胞培養(yǎng)上清VEGF的表達在pSrcs質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細胞中呈現(xiàn)明顯的下降。⑥在注入相應(yīng)胰腺癌PANC1細胞的裸鼠皮下模型中，cSrc及MVD在pSrcs質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細胞中明顯下降。結(jié)論：使用pGPU6／GFP／Neo質(zhì)粒，成功構(gòu)建了cSre特異性干擾質(zhì)粒