鞣花酸對人胰腺癌PANC-1細胞增殖和凋亡的影響及其作用機制的實驗研究.pdf

1、目的:
　　觀察鞣花酸對人胰腺癌PANC-1細胞增殖和凋亡的影響，并探討其可能的作用機制，為鞣花酸的臨床應用提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　(1)體外培養(yǎng)人胰腺癌PANC-1細胞24h后，加入終濃度為0μ g/ml（陰性對照組）、2μ g/ml、4μ g/ml、6μ g/ml、8μ g/ml的鞣花酸作用于細胞24h、48h、72h后，倒置顯微鏡觀察各加藥組細胞形態(tài)的變化，MTT法測定不同濃度組鞣花酸對細胞增殖的影響。<

2、br>　　(2)體外培養(yǎng)人胰腺癌PANC-1細胞24h后，加入終濃度為0μg/ml（陰性對照組）、2μ g/ml、4μ g/ml、6μ g/ml的鞣花酸作用于細胞24h、48h、72h后:①Hoechst33258熒光染色法觀察不同濃度組鞣花酸對細胞凋亡的形態(tài)學影響。②AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法檢測各濃度組鞣花酸對細胞凋亡率的影響。③PI法檢測各濃度組鞣花酸對細胞周期的影響。④Western blot法檢測不同濃度組鞣花酸對

3、細胞COX-2和NF-κB(p65)蛋白表達的影響。
　　結果:
　　(1)倒置顯微鏡下觀察:隨著鞣花酸藥物濃度的增加和作用時間的延長，PANC-1細胞變圓、皺縮、碎裂，培養(yǎng)板中脫落細胞逐漸增多，貼壁細胞逐漸減少。MTT法結果顯示:鞣花酸對PANC-1細胞的增殖抑制作用隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長而逐漸增強，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　(2)①Hoechst33258熒光染色法結果顯示:隨著鞣花酸藥

4、物濃度的增加和作用時間的延長，PANC-1細胞的數(shù)量逐漸減少，且核固縮、破裂的細胞，即凋亡細胞的數(shù)量逐漸增多，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。②AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法結果顯示:鞣花酸可顯著地促進PANC-1細胞凋亡，且呈明顯的時間和濃度依賴趨勢，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。③PI法結果顯示:鞣花酸可誘導PANC-1細胞發(fā)生G1期阻滯，且呈明顯的時間和濃度依賴趨勢，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。④West