9種常見致病軍團菌基因芯片檢測方法的建立.pdf

1、軍團菌是引起軍團病(Legionnaires disease，LD)和龐蒂亞克熱(Pontiacfever)的主要病原菌，它廣泛存在于天然淡水環(huán)境、土壤環(huán)境和人工水域中。由于軍團病容易暴發(fā)流行，并且致死率高，所以引起人們的廣泛關(guān)注，對于公共衛(wèi)生意義顯著。但由于軍團病與其他病原體引起的肺炎比較難辨別，因此建立一種快速、特異、靈敏的檢測方法就尤為重要。目前針對軍團菌的檢測方法有主要細菌培養(yǎng)、血清學(xué)檢測、尿抗原檢測和分子生物學(xué)檢測。但是現(xiàn)有的

2、檢測方法都具有一定的局限性，檢測種類較少，相似菌種之間不容易區(qū)分，常常出現(xiàn)漏檢、誤檢情況，并且檢測時間長、操作的步驟繁瑣，費時費力。本研究的目的就是利用軍團菌的gyrB特異基因，結(jié)合基因芯片的方法，建立起一種準(zhǔn)確、快速、高通量的針對常見致病軍團菌的檢測方法。
　　 本研究針對9種常見致病軍團菌：嗜肺軍團菌(包括 pneumophila亞種和freseri亞種)、米克戴得軍團菌、博茲曼軍團菌、長灘軍團菌、茴香軍團菌、沃氏軍團菌、戈

3、曼軍團菌、杜莫夫軍團菌、菲氏軍團菌，基于gyrB基因，設(shè)計了43條種特異性探針，利用61株標(biāo)準(zhǔn)菌株和近緣菌株對所設(shè)計的探針進行了篩選，最終得到28條，建立起特異檢測上述9種常見致病軍團菌的基因芯片。該方法在基因組DNA水平上的靈敏度為0.1 ng，純菌水平上的靈敏度可達到103CFU/mL，具有較高的靈敏度。用我們建立的芯片檢測方法對12瓶礦泉水和8例空調(diào)冷凝水進行了檢測，并與16S rRNA測序結(jié)果比較，結(jié)果顯示，芯片檢測結(jié)果完全正確