海水浴場(chǎng)常見致病菌PCR方法和基因芯片檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用.pdf

1、隨著沿海城市人口增長(zhǎng)和沿海地區(qū)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展,海水浴場(chǎng)的污染也日益受到人們的關(guān)注。娛樂用水引發(fā)的呼吸道疾病、皮膚感染、腸胃炎等疾病的報(bào)道在國(guó)內(nèi)外屢見不鮮,用大腸菌群等指示菌來評(píng)價(jià)水質(zhì)已經(jīng)受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的質(zhì)疑。因此,為減少娛樂用水風(fēng)險(xiǎn),建立海水中致病性細(xì)菌的快速、靈敏、準(zhǔn)確的檢測(cè)技術(shù)勢(shì)在必行。
　　本文建立了15種浴場(chǎng)中常見致病菌(嗜水氣單胞菌、單核增生李斯特菌、綠膿桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、金黃色葡萄球菌、腸炎沙門氏菌、痢疾志賀氏菌、空

2、腸彎曲桿菌、大腸桿菌O157:H7、創(chuàng)傷弧菌、糞鏈球菌、霍亂弧菌(非O1)、副溶血弧菌、溶藻弧菌、豚鼠氣單胞菌)的 PCR檢測(cè)方法,以及其中六種(嗜水氣單胞菌、單核增生李斯特菌、金黃色葡萄球菌、腸炎沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7、溶藻弧菌)的基因芯片檢測(cè)方法,并將這兩種方法應(yīng)用于我國(guó)四個(gè)重點(diǎn)海水浴場(chǎng)中主要致病菌的調(diào)查。具體的研究?jī)?nèi)容和研究結(jié)果如下:
　　1)2012年8-10月,于大連星海浴場(chǎng),采集表層海水,采用PCR方法調(diào)查浴

3、場(chǎng)表層海水中這15種致病菌。調(diào)查結(jié)果為:在所采集的50份樣品中,各種菌的檢出率分別為金黃色葡萄球菌(50％)、豚鼠氣單胞菌(16％)、嗜水氣單胞菌(12％)、副溶血弧菌(12％)、糞鏈球菌(10％)、單核增生李斯特菌(4％)、溶藻弧菌(4％)、腸炎沙門氏菌(2％)、大腸桿菌O157:H7(2％)、綠膿桿菌(0％)、產(chǎn)氣莢膜梭菌(0％)、痢疾志賀氏菌(0％)、空腸彎曲桿菌(0％)、創(chuàng)傷弧菌(0％)、霍亂弧菌(非O1)(0％)。由此可見:大

4、連星海浴場(chǎng)中主要存在的致病菌有金黃色葡萄球菌、豚鼠氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、副溶血弧菌、糞鏈球菌、單增李斯特菌、溶藻弧菌、腸炎沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7,依據(jù)致病菌的陽性檢出率,該浴場(chǎng)受到金黃色葡萄球菌、豚鼠氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、副溶血弧菌的污染最為嚴(yán)重。
　　2)2013年8月,于全國(guó)4個(gè)重點(diǎn)海水浴場(chǎng)(北戴河天馬浴場(chǎng)、大連星海浴場(chǎng)、青島第一海水浴場(chǎng)、寧波松蘭山浴場(chǎng)),在游泳區(qū)設(shè)置3-5個(gè)站位,用PCR方法對(duì)采集的共15份海

5、水進(jìn)行15種致病菌的檢測(cè)。調(diào)查結(jié)果為:青島第一海水浴場(chǎng)和大連星海浴場(chǎng)中檢出了嗜水氣單胞菌,寧波松蘭山浴場(chǎng)檢出了溶藻弧菌,四個(gè)浴場(chǎng)均未檢出其他病原菌。這一結(jié)果說明北戴河天馬浴場(chǎng)水質(zhì)較好,致病菌較少,其他三個(gè)浴場(chǎng)受到致病菌不同程度的污染。
　　3)2013年8月,建立了嗜水氣單胞菌、單核增生李斯特菌、金黃色葡萄球菌、腸炎沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7、溶藻弧菌六種浴場(chǎng)致病菌的基因芯片檢測(cè)方法,并對(duì)上述65份海水樣品進(jìn)行了基因芯片檢驗(yàn)

6、,結(jié)果顯示,致病菌的基因芯片檢驗(yàn)結(jié)果與PCR檢測(cè)結(jié)果100％吻合,說明基因芯片檢驗(yàn)方法可靠,結(jié)合其具有高通量的優(yōu)點(diǎn),在實(shí)際監(jiān)測(cè)工作中可以考慮應(yīng)用該方法。
　　本文建立了海水浴場(chǎng)中常見人類致病菌的快速檢測(cè)方法,該方法可快速篩查海水中的致病菌,為預(yù)防及診斷相關(guān)傳染病提供可靠的技術(shù)手段。其中,海水浴場(chǎng)中多種致病菌的基因芯片檢測(cè)方法,在國(guó)內(nèi)尚未見到報(bào)道,該檢測(cè)方法具有靈敏、特異、快速且有效減少交叉污染概率的優(yōu)點(diǎn),是海水浴場(chǎng)中人類致病菌引發(fā)