ID-1與喉癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究.pdf

1、目的：證實(shí)Id-1基因和Id-1蛋白在喉癌組織和喉癌細(xì)胞系中的表達(dá)，并對(duì)其表達(dá)情況和腫瘤的分期及惡性程度的相關(guān)性進(jìn)行研究。分化抑制因子(Id-1)又稱DNA結(jié)合抑制因子，屬于螺旋-環(huán)-螺旋(HLH)轉(zhuǎn)錄因子家族，成員之一，具有抑制細(xì)胞分化，促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用，他們可與一類具有bHLH結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合形成無功能的異源二聚體，從而抑制下游一些包含有E-box(CANNTG)或E樣序列的靶基因的轉(zhuǎn)錄，發(fā)揮其顯性負(fù)性調(diào)節(jié)功能。目前發(fā)現(xiàn)在哺乳動(dòng)

2、物中有Id-1、Id-2、Id-3、Id-4這4種蛋白，4個(gè)基因定位于不同的染色體，其表達(dá)和功能各不相同，文獻(xiàn)報(bào)道在很多腫瘤細(xì)胞中常過表達(dá)，并與腫瘤的發(fā)生、侵襲、腫瘤血管的生成等方面密切相關(guān)。有報(bào)道稱Id蛋白也可能作為判斷腫瘤惡性程度一個(gè)新指標(biāo)，為腫瘤靶向治療提供一個(gè)新的靶點(diǎn)，但其在喉癌中的表達(dá)情況及其與喉癌分期的相關(guān)性的研究一直未見報(bào)道。
　　方法：（1）收集標(biāo)本30例喉癌組織和10例正常組織均來自第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院和唐都醫(yī)院

3、2007年10月至2008年4月所收的手術(shù)病例，培養(yǎng)Hep-2喉癌細(xì)胞株細(xì)胞，提取Hep2細(xì)胞系和各組織標(biāo)本的cDNA。根據(jù)genbank上的Id-1基因序列設(shè)計(jì)引物，通過反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）對(duì)30例喉癌組織，10例癌旁正常組織和一個(gè)喉癌細(xì)胞株在基因上對(duì)Id-1基因的表達(dá)進(jìn)行檢測。（2）通過蛋白質(zhì)印跡雜交法（Westernblot法）對(duì)喉癌組織、癌旁正常組織和喉癌細(xì)胞株在蛋白水平進(jìn)行檢測。（3）通過計(jì)算機(jī)量化對(duì)正常組織和各期喉癌

4、組織的Id-1蛋白的表達(dá)差異性進(jìn)行分析，并對(duì)不同的分期的喉癌組織及ⅢⅣ期的表達(dá)同Ⅰ期和Ⅱ期的表達(dá)差異性進(jìn)行分析。（4）通過免疫組化分析正常組織和不同分化的喉癌組織Id-1蛋白表達(dá)差異性進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：（1）通過反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR），將擴(kuò)增的基因片斷跑膠，在紫外燈下觀察，并拍照，喉癌組織和喉癌細(xì)胞株中Id-1基因PCR結(jié)果中有明亮的和所預(yù)期的Id-1基因片段大小相同的條帶，而正常喉組織的產(chǎn)物中沒有相對(duì)應(yīng)的條帶,經(jīng)測序證

5、實(shí)和genbank上的序列相同。說明喉癌組織和喉癌細(xì)胞株中Id-1基因高表達(dá)，而正常喉組織中沒有Id-1的表達(dá)。（2）免疫組化和免疫印跡顯示：喉癌組織和喉癌細(xì)胞株中Id-1蛋白高表達(dá)，而正常喉組織中沒有Id-1蛋白表達(dá)。（3）Id-1蛋白的表達(dá)與喉癌組織的臨床分期、分化程度具有正相關(guān)性(P<0.05)。
　　結(jié)論：（1）Id-1基因在喉癌組織和喉癌細(xì)胞株中高表達(dá)，而在正常喉組織中不表達(dá)。（2）Id-1蛋白在喉癌組織和喉癌細(xì)胞株中高