2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、【目的】研究ADAMTS13 及其重組體蛋白于體外剪切力條件下裂解VWF,降低血小板黏附能力的差異。
   【方法】
   (1)將ADAMTS13 及其重組體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化擴(kuò)增,并大量提取,同時(shí)雙酶切瓊脂糖凝膠電泳鑒定各質(zhì)粒。
   (2)將已擴(kuò)增并鑒定正確的ADAMTS13 及其重組體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入COS7細(xì)胞,收集瞬時(shí)表達(dá)ADAMTS13 及其重組體蛋白的細(xì)胞培養(yǎng)上清,通過超濾管獲得初步純化的重組蛋白,Western

2、-Blot 檢測(cè)各瞬時(shí)表達(dá)細(xì)胞分泌的蛋白。
   (3)利用流體力學(xué)裝置Flow-Chamber(平板流動(dòng)小室)培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,并通過蠕動(dòng)泵加壓流動(dòng)培養(yǎng)基模擬人體血管內(nèi)流動(dòng)狀態(tài),檢測(cè)ADAMTS13 及其重組體蛋白對(duì)于損傷的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分泌的UL-VWF的裂解作用以及下調(diào)血小板黏附、延緩血栓形成的能力差異。
   【結(jié)果】
   (1)成功在真核表達(dá)細(xì)胞內(nèi)瞬時(shí)表達(dá)ADAMTS13 及其重組體蛋白,通過簡(jiǎn)

3、單純化各種表達(dá)蛋白,Western-Blot 證實(shí)為正確分子量。
   (2)在Flow-Chamber模擬人體血管內(nèi)剪切力作用下,全長(zhǎng)FL(Full length)蛋白和MDTCS(截除羧基端TSP2-8和CUB1+2 片段)蛋白可以不同程度的抑制血小板凝集,delCUB(截除羧基端CUB1+2 片段)蛋白抑制血小板凝集的能力顯著下降。
   【結(jié)論】
   (1)成功瞬時(shí)表達(dá)全長(zhǎng)ADAMTS13 及其重組體蛋

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