T細(xì)胞免疫及黑質(zhì)自身抗體在帕金森病發(fā)病機(jī)制中作用的初步研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文T細(xì)胞免疫及黑質(zhì)自身抗體在帕金森病發(fā)病機(jī)制中作用的初步研究姓名：張艷玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：神經(jīng)生物學(xué)指導(dǎo)教師：蘇炳銀20080501第二軍醫(yī)人學(xué)博士學(xué)位論文P D 嚴(yán)重程度的影響；同時(shí)在實(shí)驗(yàn)中利用P D 小鼠的血清和臨床病例的血清，進(jìn)行了初步的黑質(zhì)靶抗原的分析。本研究分為三部分進(jìn)行：第一部分：實(shí)驗(yàn)中使用不同劑量丫射線( O G ”O(jiān) ．5 G y 、2 ．O G y 和3 ．5 G y ) 全身照射對(duì)小鼠進(jìn)行

2、預(yù)處理，之后使用M P T P 腹腔注射建立P D 小鼠模型。用高效液相檢測(cè)小鼠紋狀體多巴胺和其代謝產(chǎn)物的水平、免疫組化檢測(cè)黑質(zhì)神經(jīng)元數(shù)量和膠質(zhì)細(xì)胞活化，同時(shí)檢測(cè)了射線照射后外周血淋巴細(xì)胞數(shù)量改變。結(jié)果提示：2 ．O G y 和3 ．5 G W 射線進(jìn)行全身預(yù)照射后，外周血淋巴細(xì)胞數(shù)量迅速而明顯的下降；而O ．5 G w 射線進(jìn)行全身預(yù)照射后，在觀測(cè)的7 天內(nèi)，外周血淋巴細(xì)胞數(shù)量總體評(píng)價(jià)較無(wú)照射對(duì)照組稍增高。高效液相提示，0 ．5 G

3、y 的丫射線進(jìn)行全身預(yù)照射后，紋狀體多巴胺含量較對(duì)照組降低，而2 ．o G y 的丫射線進(jìn)行全身預(yù)照射后，紋狀體多巴胺含量較對(duì)照組增高，3 ．5 G y 的的丫射線進(jìn)行全身預(yù)照射后，紋狀體多巴胺含量與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異。我們認(rèn)為：1 、不同的低劑量Y 射線全身預(yù)照射可以對(duì)M P T P 致C 5 7 B L ／6 小鼠多巴胺神經(jīng)元損傷的嚴(yán)重程度有不同影響，并非都可以提供神經(jīng)保護(hù)作用。我們認(rèn)為在本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的2 ．O G “ 射線進(jìn)行全

4、身預(yù)照射的神經(jīng)保護(hù)作用，可能是因?yàn)橥庵苎辛馨图?xì)胞的大量減少導(dǎo)致的；與之相反，O ．5 G w 射線進(jìn)行全身預(yù)照射后，外周血中淋巴細(xì)胞輕度增多，導(dǎo)致M P T P 注射后的紋狀體多巴胺含量進(jìn)一步降低。2 、以往關(guān)于“射線的神經(jīng)保護(hù)”的研究中認(rèn)為，輻射的毒物興奮效應(yīng)( r a d i a t i o n h o 衄e s i s ) 可能是神經(jīng)保護(hù)作用產(chǎn)生的機(jī)制，但是在本研究中提示，該機(jī)制未明顯參與神經(jīng)保護(hù)。第二部分：實(shí)驗(yàn)中分別利用C D

5、 4 敲基因小鼠、C D 8 敲基因小鼠和野生型小鼠，在接受M P T P 腹腔注射后，觀察各組小鼠在M P T P 處理后P D 嚴(yán)重程度的改變。衡量嚴(yán)重程度的指標(biāo)使用：紋狀體多巴胺和其代謝產(chǎn)物的水平、免疫組化檢測(cè)黑質(zhì)神經(jīng)元數(shù)量、W e s t e m —B l o t 檢測(cè)的紋狀體T H 蛋白水平。同時(shí)對(duì)比觀察了不同組小鼠黑質(zhì)膠質(zhì)細(xì)胞活化情況。結(jié)果提示：C 5 7 B L ／6 小鼠在M P T P 腹腔注射后1 0 天，H P L

6、 C ．E C 法檢測(cè)提示紋狀體D A ，D o P A C 和H V A 均明顯下降；免疫組化發(fā)現(xiàn)黑質(zhì)D A 能神經(jīng)元數(shù)量減少，小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞活化；w e s t e r n - b l o t 提示紋狀體T H 含量下降。分別敲除c D 4 “c D 8 + T 細(xì)胞后，兩組敲基因動(dòng)物均出現(xiàn)D A 能神經(jīng)元損傷程度較野生型小鼠減輕的現(xiàn)象。但是在膠質(zhì)細(xì)胞活化方面卻有不同的表現(xiàn)：與w T 相比，C D 4 一K o 組小膠質(zhì)細(xì)