帕金森病發(fā)病機(jī)制中自身抗體靶蛋白的篩選.pdf

1、背景：帕金森病(Parkinson's disease，PD)，又稱“震顫麻痹”，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見(jiàn)的變性疾病，主要表現(xiàn)為：靜止性震顫、運(yùn)動(dòng)減少、肌強(qiáng)直、姿勢(shì)異常。多巴胺神經(jīng)元的特異性損害，是PD發(fā)病的重要特點(diǎn)。近年來(lái)的研究提示，帕金森病患者血清和腦脊液中可能存在自身抗體參與對(duì)多巴胺神經(jīng)元的特異性損害。然而，自身抗體攻擊的靶目標(biāo)尚不清楚。目前相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，腦黑質(zhì)組織中的蛋白可能是體液免疫中自身抗體攻擊的靶蛋白，但該靶蛋白是何種蛋白仍不清

2、楚。鑒于此，我們利用尋找PD患者血清抗體IgG與正常志愿者血清IgG所結(jié)合黑質(zhì)部位蛋白的差異性蛋白，并對(duì)其進(jìn)行鑒定，初步篩選與帕金森病發(fā)病機(jī)制有關(guān)的自身抗體靶蛋白。旨在初步確定黑質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞上與帕金森發(fā)病相關(guān)的靶蛋白，繼而為進(jìn)一步闡明體液免疫在PD發(fā)病中的作用提供依據(jù)，并為帕金森病的免疫治療和免疫診斷提供新思路和新策略。
　　 目的：篩選出帕金森病發(fā)病機(jī)制中自身抗體攻擊的黑質(zhì)靶蛋白，進(jìn)一步闡明體液免疫在帕金森病發(fā)病中的作用機(jī)制，

3、為更好地理解和揭開(kāi)帕金森病發(fā)病機(jī)制和免疫治療帕金森病奠定理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：分別收集臨床確診的帕金森病患者和正常志愿者的血清，用免疫親和層析法分離出血清IgG，；提取正常SD大鼠黑質(zhì)膜蛋白及胞漿蛋白制備抗原，用western blot結(jié)合免疫沉淀技術(shù)篩選出與血清IgG相互作用的蛋白，SDS-PAGE電泳進(jìn)行蛋白分離后獲得差異蛋白條帶，質(zhì)譜鑒定差異蛋白并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。
　　 結(jié)果：(1)PD組與正常志愿者組

4、的血清IgG僅與大鼠黑質(zhì)結(jié)構(gòu)中的膜蛋白發(fā)生結(jié)合，而與胞漿蛋白不發(fā)生結(jié)合。
　　 (2)用Western-Blot方法篩選帕金森病與正常志愿者組血清IgG結(jié)合大鼠黑質(zhì)膜蛋白的初步分析，根據(jù)此方法未發(fā)現(xiàn)二者之間有明顯、統(tǒng)一的的特異性差異；
　　 (3)在PD組與正常志愿者組兩組膜蛋白的免疫沉淀中可以找到一個(gè)差異性條帶，分子量約為60KDa。
　　 (4)利用離子阱串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-IRON-TRAP-MS/MS)及