GSK3β調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞自噬在帕金森病發(fā)病中的作用及機制研究.pdf

1、目的：篩選穩(wěn)定表達A30Pα-synuclein的PC12細(xì)胞株為研究對象，通過細(xì)胞和分子水平的實驗，初步探討表達不同活性的GSK3β對自噬通路的調(diào)節(jié)是否會引起α-synuclein自噬水平的變化及其對細(xì)胞生長的影響。
　　方法：
　　1.將A30Pα-synuclein質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至生長狀態(tài)良好的PC12細(xì)胞，并通過G418篩選穩(wěn)定表達細(xì)胞。
　　2.脂質(zhì)體法將GSK-3β過表達質(zhì)粒、GSK-3β沉默質(zhì)粒及空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至

2、A30Pα-synuclein的PC12細(xì)胞株，篩選不同穩(wěn)定表達GSK3β活性的細(xì)胞株，Werstern blot檢測GSK-3β轉(zhuǎn)染后的表達情況，驗證轉(zhuǎn)染效率。
　　3.Western blot檢測各組細(xì)胞中LC-3Ⅱ、Beclin1、α-synuclein的表達。
　　4.MTT法檢測細(xì)胞增殖能力的變化。
　　5.TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡變化。
　　結(jié)果：
　　1.GSK3β過表達組與GSK3β沉默組、

3、空白質(zhì)粒組、空白對照組相比：LC-3Ⅱ及 Beclin1的表達增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05)；α-synuclein的表達減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05)；MTT及TUNEL法結(jié)果表明細(xì)胞的凋亡減少，存活增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　2.GSK3β沉默組與GSK3β沉默組、空白質(zhì)粒組、空白對照組相比：LC-3Ⅱ及Beclin1的表達減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；α-synuclein的表達增