抗病毒中草藥的篩選及其對(duì)擬穴青蟹部分血清免疫因子的影響.pdf

1、擬穴青蟹（Scyllaparamamosain）俗稱青蟹，是我國(guó)沿海地區(qū)非常重要的養(yǎng)殖品種。但是，隨著養(yǎng)殖面積的擴(kuò)大和養(yǎng)殖密度的增加，青蟹病害呈越來(lái)越高發(fā)的趨勢(shì)。由病毒、細(xì)菌和寄生蟲等導(dǎo)致的病害問(wèn)題，嚴(yán)重阻礙了青蟹養(yǎng)殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。近年來(lái)，江浙、廣東、福建等青蟹主要養(yǎng)殖地區(qū)出現(xiàn)了嚴(yán)重的疾病，青蟹雙順?lè)醋硬《?1（Mud crab dicistrovurus-1）和青蟹呼腸孤病毒在養(yǎng)殖青蟹和野生青蟹中都有較高的攜帶率，是導(dǎo)致疾病發(fā)生

2、的重要病原。對(duì)于病毒病來(lái)說(shuō)，沒(méi)有有效的治療藥物，提前預(yù)防是降低病害發(fā)生，減少經(jīng)濟(jì)損失的重要途徑。中草藥不僅能夠殺菌消毒、促進(jìn)水生動(dòng)物的生長(zhǎng)，而且能夠增強(qiáng)其免疫功能、提高抗病能力。本文通過(guò)利用中草藥水提取物浸泡擬穴青蟹，通過(guò)比較成活率，篩選抗病毒中草藥，并研究這些中草藥對(duì)青蟹部分血清免疫因子的影響，探討抗病機(jī)理。
　　首先，經(jīng)過(guò)預(yù)備實(shí)驗(yàn)，用200種中草藥水提取物對(duì)擬穴青蟹進(jìn)行浸泡，篩選出能夠提高擬穴青蟹成活率的中草藥。篩選出的中草藥

3、有：虎杖、青葙子、香薷、天花粉、番石榴葉、苦參、車前草、射干、菟絲子、夏枯草、百部、白芷、柴胡、龍膽草、石榴皮和連翹16種中草藥，他們的成活率分別為：51.1％，38%,40%，56%,50%，40%,42%，60%,30%，38%,40%，40%,47%，31%，42%，50%。對(duì)照組成活率為33%，除了龍膽草和菟絲子外，其他中草藥浸泡擬穴青蟹的成活率均高于對(duì)照組。由累計(jì)死亡率結(jié)果可知，各組擬穴青蟹在用藥后第三天均開始死亡。檢測(cè)死亡擬

4、穴青蟹蟹鰓后，發(fā)現(xiàn)番石榴葉、車前草和石榴皮水提取物浸泡擬穴青蟹沒(méi)有檢測(cè)出病毒。說(shuō)明這三種中草藥水提取物能夠抑制青蟹病毒繁殖。
　　其次，通過(guò)對(duì)青蟹的幾個(gè)免疫因子進(jìn)行調(diào)查。發(fā)現(xiàn)在殼長(zhǎng)和體重相似的情況下，不同肥滿度青蟹的免疫功能不同。養(yǎng)殖青蟹血清中的LSZ、PO、ACP、AKP活性與肥滿度之間的相關(guān)性極顯著，其中LSZ活性符合二次曲線方程、PO活性符合S曲線方程、AKP活性和ACP活性冪方程的規(guī)律。而野生青蟹只有SOD與肥滿度之間相關(guān)

5、性極顯著，符合對(duì)數(shù)方程規(guī)律。
　　最后，研究了番石榴葉、連翹、天花粉和甘草水提物對(duì)擬穴青蟹免疫功能的影響。其中，番石榴葉水提取物浸泡青蟹后，擬穴青蟹血清ACP、AKP、SOD和LSZ等免疫相關(guān)酶活性都呈現(xiàn)先升高，而后降低并趨于平穩(wěn)的變化趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)組青蟹血清AKP活性和LSZ活性于24小時(shí)時(shí)達(dá)到最大值，且均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；而ACP活性和SOD活性于48小時(shí)時(shí)達(dá)到最大值，且均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；72小時(shí)時(shí)對(duì)

6、照組青蟹PO活性突然急劇升高，且顯著高于實(shí)驗(yàn)組（P<0.05），其余時(shí)間實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間差異不顯著（P>0.05）；AKP只在24h達(dá)到最大值，并顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。連翹組青蟹血清ACP活性PO活性、AKP活性在48h達(dá)到最大值，并顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，SOD和LSZ活性在24h達(dá)到最大值，與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）；天花粉組青蟹血清ACP和AKP在24達(dá)到最大值，并且顯著高于對(duì)照組（P<0.05）,LSZ

7、和PO活性在48h達(dá)到最大值，顯著高于對(duì)照組（P<0.05）,SOD活性在各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照ACP組差異不顯著；甘草組青蟹血清ACP和AKP在24達(dá)到最大值，并且顯著高于對(duì)照組（P<0.05）,LSZ和PO活性在48h達(dá)到最大值，顯著高于對(duì)照組（P<0.05）,SOD活性在各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組差異不顯著。說(shuō)明被篩選出的中草藥在提高青蟹免疫功能方面具有不同的作用。
　　總之，本研究通過(guò)從大量中草藥中篩選能夠提高青蟹免疫功能的中草藥，然后通過(guò)