嗜熱吸水鏈霉菌抗原制劑誘導(dǎo)大棚作業(yè)農(nóng)民肺動物模型.pdf

1、目的:
　　 1、探討嗜熱吸水鏈霉菌是否為大棚作業(yè)農(nóng)民肺的致病菌并探討誘導(dǎo)大棚肺動物模型的嗜熱吸水鏈霉菌抗原的最適宜劑量。
　　 2、比較霧化吸入和鼻內(nèi)滴注嗜熱吸水鏈霉菌抗原制劑誘導(dǎo)豚鼠大棚肺模型的差異。
　　 3、比較嗜熱吸水鏈霉菌抗原制劑誘導(dǎo)豚鼠和C57BL/6小鼠大棚肺模型的差異。
　　 方法:
　　 1、不同劑量嗜熱吸水鏈霉菌抗原制劑誘導(dǎo)豚鼠大棚肺模型：成年雌性豚鼠40只，體重：300～4

2、00g，隨機(jī)分為A、B、C、D組，每組10只。A組為對照組，予0.9％無菌生理鹽水0.3ml鼻內(nèi)滴注，每周連續(xù)滴注3天，連續(xù)滴注12周。B、C、D為模型組，分別予嗜熱吸水鏈霉菌抗原制劑0.2ml、0.3ml、0.4ml三種劑量鼻內(nèi)滴注，每周連續(xù)滴注3天，連續(xù)滴注12周。分別于滴注后的1、2、3、4、12周末將豚鼠麻醉固定后行64層螺旋CT拍攝。CT檢查后每組隨機(jī)選擇2只豚鼠處死，取右肺石蠟包埋，HE染色，左肺組織勻漿后置于Emerson

3、液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
　　 2、霧化吸入和鼻內(nèi)滴注嗜熱吸水鏈霉菌抗原制劑誘導(dǎo)大棚肺動物模型的比較：成年雌性豚鼠40只，體重：300～400g，隨機(jī)分為模型組（霧化組A1、鼻滴組B1）和對照組（霧化組A2、鼻滴組B2），每組20只。A1組：予5m1嗜熱吸水鏈霉菌抗原制劑日1次霧化吸入，15min/次，連續(xù)12周；B1組：予0.3ml抗原制劑鼻內(nèi)滴注，連續(xù)3次/周，持續(xù)12周；A2組：予0.9％無菌生理鹽水Sml日1次霧化，15min

4、/次，連續(xù)12周；B2組：予0.9％無菌生理鹽水0.3ml鼻滴，連續(xù)3次/周，持續(xù)12周。分別于實(shí)驗(yàn)后第1、2、3、12周末將豚鼠麻醉固定后行64層螺旋CT拍攝。CT檢查后每組隨機(jī)選擇2只豚鼠處死，取肺組織病理切片及組織勻漿進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。
　　 3、嗜熱吸水鏈霉菌抗原制劑誘導(dǎo)豚鼠和C57BL/6小鼠大棚肺模型的比較：成年雌性豚鼠10只，體重：300～400g;8周齡雌性C57BL/6小鼠10只，體重：25～30g。豚鼠組(T組)

5、：予0.3ml抗原制劑鼻內(nèi)滴注，連續(xù)3次/周，持續(xù)12周；C57BL/6小鼠組（C組）：予0.03ml抗原制劑鼻內(nèi)滴注，連續(xù)3次/周，持續(xù)12周。分別于抗原滴注后第1、2、3、12周末每組隨機(jī)選擇2只實(shí)驗(yàn)動物異氟烷過量麻醉處死，取肺組織病理切片及組織勻漿進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。
　　 結(jié)果:
　　 1、不同劑量嗜熱吸水鏈霉菌抗原制劑誘導(dǎo)豚鼠大棚肺模型病理改變：B組于第2周末，C、D兩組分別于第1周末出現(xiàn)明顯肺泡炎改變，可見炎癥細(xì)胞

6、浸潤，以淋巴細(xì)胞為主，并可見單核細(xì)胞滲出；B組于第4周末，C組于第3周末，D組于第2周末可見由巨噬細(xì)胞、類上皮細(xì)胞和朗罕氏巨細(xì)胞組成的肉芽腫形成；C組在12周末滴注結(jié)束時(shí)可觀察到肺成纖維細(xì)胞數(shù)目增多，B組無明顯纖維化改變，D組豚鼠多在第3周因肺部感染死亡。2．B、C、D組CT影像上均可見彌漫性磨玻璃影，后可見雙肺多發(fā)性、邊緣模糊的斑片狀及微小結(jié)節(jié)狀影，多呈小葉中心型。肺組織研磨后置于Emerson液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)后在B、C、D組均可見嗜

7、熱吸水鏈霉菌生長。
　　 2、霧化吸入和鼻內(nèi)滴注嗜熱吸水鏈霉菌抗原制劑誘導(dǎo)豚鼠大棚肺模型影像學(xué)改變：A1組：第1周末，豚鼠肺CT未見異常；第2周末，可見雙肺彌漫性磨玻璃影；第3周末，可見雙肺可出現(xiàn)散在邊界不清的微小結(jié)節(jié)影；第12周末，可見明顯的纖維條索影。B1組：第1周末，豚鼠肺CT可見雙肺磨玻璃樣改變；第2周末，可見雙肺多發(fā)性邊緣模糊、密度不均的斑片狀影；第3周末，可見雙肺散在分布的小結(jié)節(jié)影；第12周末，可見明顯的沿支氣管分布

8、的纖維條索影。對照(A2、B2)組無異常。病理改變：A1組：第1周末，豚鼠肺組織病理切片未見異常；第2周末，可見肺泡壁和肺泡間質(zhì)以淋巴細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤；第3周末，可見巨噬細(xì)胞、類上皮細(xì)胞和朗罕氏巨細(xì)胞組成的肉芽腫；第12周末，可見成纖維細(xì)胞增生。B1組：第1周末，可見明顯的淋巴細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤；第2周末，可見肺泡壁增寬，單核細(xì)胞滲出；第3周末，可見肉芽腫形成；第12周末，可見成纖維細(xì)胞增生、膠原沉積。對照(A2、B2)組無異

9、常。肺組織研磨后置于Emerson液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)后在A1、B1組均可見嗜熱吸水鏈霉菌生長。
　　 3、嗜熱吸水鏈霉菌抗原制劑誘導(dǎo)豚鼠和C57BL/6小鼠大棚肺模型豚鼠（T組）：第1周末，可見淋巴細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤；第2周末，可見肺泡壁增寬，單核細(xì)胞滲出；第3周末，可見肉芽腫形成；第12周末，可見成纖維細(xì)胞數(shù)目增多。C57BL/6小鼠（C組）：小鼠肺組織病理學(xué)改變同豚鼠。豚鼠、小鼠肺組織研磨后置于Emerson液體培養(yǎng)基中培

10、養(yǎng)后均可見嗜熱吸水鏈霉菌生長。
　　 結(jié)論:
　　 1、嗜熱吸水鏈霉菌作為致病菌可以在實(shí)驗(yàn)動物體內(nèi)引起與人類農(nóng)民肺相似的過敏性肺泡炎的病變，0.3ml為構(gòu)建嗜熱吸水鏈霉菌抗原誘導(dǎo)豚鼠大棚肺模型的標(biāo)準(zhǔn)劑量。
　　 2、霧化吸入和鼻內(nèi)滴注兩種方法均可誘導(dǎo)大棚肺動物模型，二者所致影像學(xué)和病理學(xué)改變基本一致，霧化法所致肺泡炎改變較鼻滴法遲一周出現(xiàn)。
　　 3、嗜熱吸水鏈霉菌抗原制劑霧化吸入和鼻內(nèi)滴注在豚鼠和C57