急性肺曲霉菌病動物模型建立及腫塊型肺真菌病CT影像學(xué)特征研究.pdf

1、背景：
　　 隨著器官移植及造血干細(xì)胞移植的廣泛開展，化療藥、免疫抑制劑的廣泛應(yīng)用，肺部機遇性感染發(fā)病率迅速上升，是導(dǎo)致免疫抑制患者高死亡率的重要原因之一，如骨髓移植患者及機械通氣患者肺部感染的死亡率高達(dá)90％。降低死亡率的關(guān)鍵是早期及時的正確診斷，以便能及時有效的給予治療，遺憾的是目前機遇性感染尤其是機遇性真菌感染的早期及正確診斷極具挑戰(zhàn)性，誤診漏診率在各種肺部感染中居高不下。真菌是常見的機遇性感染致病原之一，其中又以曲霉菌最

2、為多見。為了提高對肺部真菌病影像學(xué)特點的認(rèn)識，提高其診斷準(zhǔn)確率，本研究動物實驗部分探討急性煙曲霉菌肺部感染的動物模型制作方法并著重研究其肺部CT表現(xiàn)及演變規(guī)律。在此基礎(chǔ)上，我們回顧性分析腫塊或結(jié)節(jié)型肺真菌病的流行病學(xué)特點及CT表現(xiàn)，并與炎癥、結(jié)核及良性腫瘤相比較，旨在總結(jié)腫塊或結(jié)節(jié)型肺真菌病的影像特點，為鑒別診斷提供依據(jù)。
　　 第一部分急性肺曲霉菌病動物模型建立及CT 征象學(xué)研究
　　 目的：通過建立氣管源性與血管源性

3、新西蘭大白兔急性肺部煙曲霉菌病模型，總結(jié)模型建立方法及其CT表現(xiàn)，并比較氣管源性與血管源性模型動物生存期和肺外臟器病變出現(xiàn)情況的差異及CT表現(xiàn)的區(qū)別。
　　 材料與方法：
　　 1．實驗動物及分組健康新西蘭大白兔48只，隨機編號分為6組，1-4組各9只為免疫抑制組，5、6組各6只為非免疫抑制組，1、3、5組動物經(jīng)皮穿刺氣管法接種菌液，2、4、6組經(jīng)耳緣靜脈注射法接種菌液，1、2組接種菌液濃度為5×107 cfu/ml，3

4、-6組接種濃度為5×108 cfu/ml，接種菌液量均為0.2ml。
　　 2．免疫抑制狀態(tài)建立及菌液接種接種菌株為煙曲霉菌標(biāo)準(zhǔn)株。
　　 1-4組實驗動物，第1-5天每日耳緣靜脈注射阿糖胞苷525mg/m2，第1、2天每天靜脈注射甲強龍5mg/kg，第8、9天每天靜脈注射阿糖胞苷484mg/m2。
　　 為預(yù)防混合感染，第4天起，1-6組動物均給予萬古霉素15mg/kg、頭孢他啶150mg/kg 靜脈注射，每日

5、1次；慶大霉素5mg/kg 靜脈注射，隔日1次。
　　 實驗第二天進(jìn)行菌液接種，麻醉后根據(jù)分組情況按照不同方式不同菌液濃度進(jìn)行接種。
　　 3．CT 掃描分別于接種前1天、接種后1、3、5、7、9、11、13天將所有當(dāng)時存活的實驗動物進(jìn)行肺部CT 掃描。采用Sensation 16 層螺旋CT 機。使用兒童頭部掃描SFOV，螺旋掃描，床進(jìn)15mm/周，動物俯臥位，頭先進(jìn)；掃描條件：120KV,200mA；
　　

6、DFOV 選擇100-120mm；掃描模式：1.0mm×16；肺算法(60)和標(biāo)準(zhǔn)算法重建（40）；
　　 常規(guī)層厚：3mm；重建層厚：1mm；
　　 詳細(xì)記錄病變特征，病變出現(xiàn)的時間，及多次檢查的病變演變情況。根據(jù)病變的形態(tài)、密度將病變分為結(jié)節(jié)狀GGO、片狀GGO、實性結(jié)節(jié)和片狀實變4種，根據(jù)病變部位分為中心型與外圍型，按數(shù)量分為單發(fā)與多發(fā)，且記錄彌漫性病變出現(xiàn)情況。
　　 4．動物解剖、病理檢查及真菌培養(yǎng)每日

7、觀察動物一般狀況并及時解剖死亡動物、留取肺標(biāo)本做真菌培養(yǎng)（SDA斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)并做顯微鏡下鑒定）及病理檢查（HE 染色）、記錄動物存活時間。接種后第13天將所有存活動物進(jìn)行CT 掃描后處死，解剖、留取標(biāo)本。
　　 5．建模成功判斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)判定建模情況：(1)成功接種菌液；(2)兔肺標(biāo)本真菌培養(yǎng)有煙曲霉菌菌落生長，鏡下鑒定為煙曲霉菌；(3)觀察期內(nèi)兔胸部CT 掃描發(fā)現(xiàn)病灶；
　　 (4)病灶部位肺標(biāo)本病理切片HE

8、染色鏡下發(fā)現(xiàn)病變；滿足條件(1)及(3)或（4）者視為建模成功，滿足(1)和(2)但不具備(3)和(4)者視為煙曲霉菌肺部定植狀態(tài)(潛伏感染)，僅滿足（1）而不滿足其他條件者視為建模失敗。
　　 結(jié)論：
　　 1、經(jīng)皮穿刺氣管接種法與經(jīng)耳緣靜脈血管接種法均能制作肺部煙曲霉菌感染模型，免疫機能的破壞是建模成功的關(guān)鍵因素。免疫抑制動物感染煙曲霉菌后，病情進(jìn)展快，存活時間短，平均存活期1周左右。血管接種組免疫抑制動物因易出現(xiàn)多

9、器官的病變，生存期更短。
　　 2、免疫抑制兔接種曲霉菌后3天左右即出現(xiàn)病變，且出現(xiàn)病變時間不受接種方式及菌液濃度的影響。
　　 3、免疫抑制兔急性肺曲霉菌病模型CT表現(xiàn)最早以肺外圍片狀GGO為主，之后出現(xiàn)結(jié)節(jié)狀GGO、實性結(jié)節(jié)，病程后期則以片狀實變多見。病變可單發(fā)或多發(fā)。彌漫病變及片狀實變的出現(xiàn)預(yù)示病情惡化、預(yù)后不良。
　　 4、免疫抑制兔急性肺曲霉菌病模型CT表現(xiàn)以片狀GGO為主，其他征象有片狀實變、結(jié)節(jié)狀G

10、GO及實性結(jié)節(jié)等。氣管源性與血管源性免疫抑制兔急性肺曲霉菌病模型CT表現(xiàn)無明顯差異。
　　 5、肺部接種煙曲霉菌的新西蘭大白兔的CT表現(xiàn)能反映其病理變化，GGO提示肺泡少量炎性滲出、出血、間質(zhì)內(nèi)炎細(xì)胞浸潤，而肺實變則說明有較嚴(yán)重的肺實變出血、間質(zhì)浸潤，兩種病變都可出現(xiàn)血管栓塞。
　　 第二部分腫塊型肺真菌病的CT 形態(tài)學(xué)表現(xiàn)及鑒別診斷
　　 目的：回顧性分析腫塊型肺真菌病患者的病灶CT 形態(tài)學(xué)特征并與其他肺內(nèi)良性

11、結(jié)節(jié)/腫塊相比較，旨在探討肺部真菌感染的CT表現(xiàn)及鑒別診斷依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 回顧性分析肺內(nèi)良性結(jié)節(jié)或腫塊病例共173例。其中真菌38例，67個病灶；
　　 炎癥43例，46個病灶；結(jié)核55例，64個病灶；良性腫瘤37例，37個病灶；
　　 共214個病灶納入研究。分析各組患者的年齡、性別及CT表現(xiàn)，包括病灶大小、形態(tài)（類圓形、楔形、不規(guī)則形）、界面（清楚光整、清楚但不光整、模糊）、邊緣特征

12、（淺分葉、深分葉、直邊征、毛刺、尖角或棘狀突起、暈征）、內(nèi)部結(jié)構(gòu)（壞死或空洞形成、洞壁厚薄、內(nèi)壁是否光整，是否有鈣化、脂肪、空氣半月征、邊緣裂隙）及鄰近胸膜改變（胸膜牽拉、肥厚）和衛(wèi)星灶出現(xiàn)情況，并與炎癥、結(jié)核及良性腫瘤比較，探討腫塊或結(jié)節(jié)型肺真菌病與其他三類疾病之間的鑒別點。
　　 結(jié)論：
　　 1、腫塊型肺真菌病好發(fā)于40-60歲男性患者，與其他肺內(nèi)良性結(jié)節(jié)/腫塊相似。
　　 2、腫塊型肺真菌病病灶長徑變異較

13、大，以2-4cm 多見，病灶大小不能單獨做為鑒別診斷的依據(jù)。
　　 3、腫塊型肺真菌病常見CT表現(xiàn)為類圓形或不規(guī)則形，界面清楚但不光整，病灶邊緣易出現(xiàn)棘狀突起、淺分葉或深分葉、暈征，空洞不常見但以厚壁空洞為主?？諝獍朐抡骷斑吘壛严墩鳛槟[塊型肺真菌病特異性表現(xiàn)。
　　 4、腫塊型肺真菌病、結(jié)核、良性腫瘤及炎性腫塊/結(jié)節(jié)征象多有相互重疊，但多數(shù)征象在不同疾病的出現(xiàn)率存在差異，對各個征象的詳細(xì)分析和綜合判斷有助于腫塊型肺真菌性