法舒地爾提高豬缺血誘導(dǎo)心臟死亡供者(DCD)心保存效果實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：
　　來(lái)源于腦死亡供體(Donation from Brain death，DBD)的供心缺乏，嚴(yán)重制約了心臟移植的進(jìn)一步發(fā)展。全球年心臟移植數(shù)量無(wú)顯著增加，甚至有所下降。因此，國(guó)際上一致認(rèn)為DCD是最具開(kāi)發(fā)潛能的供者來(lái)源。心臟死亡供者（donors after cardiac death，DCD），在捐獻(xiàn)之前不可逆的循環(huán)停止，心臟受損過(guò)多，包括缺血-再灌注(ischemia-reperfusion,I-R)損傷，甚至出現(xiàn)不

2、可逆的心臟損傷（irreversible cardiac injury），導(dǎo)致移植器官早期失功（early poor graft function）。迄今為止，DCD心進(jìn)行臨床心臟移植，實(shí)際上只有零星報(bào)道。
　　Rho-激酶(ROCK)抑制劑“法舒地爾”（fasudil）在“抗缺血-再灌注”(ischemia-reperfusion,I-R)損傷方面，效果令人矚目。實(shí)驗(yàn)證明，法舒地爾在兔供心保護(hù)和豬局限性心肌頓抑心肌保護(hù)發(fā)揮作用。

3、將法舒地爾用于豬缺血誘導(dǎo)DCD心保存，效果及作用機(jī)制如何，尚不清楚，迄今尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　目的：
　　實(shí)驗(yàn)旨在探討Rho-激酶（ROCK）抑制劑“法舒地爾”對(duì)缺血誘導(dǎo)的DCD供心的保護(hù)效果及機(jī)制，為今后人類(lèi)缺血誘導(dǎo)的DCD供心保護(hù)、開(kāi)發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　材料和方法：
　　家豬16只，雄性，體重28±3Kg，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組(每組n=8)：(一)實(shí)驗(yàn)組：缺血誘導(dǎo)供心停跳（血液回收至儲(chǔ)血器中），停跳后繼續(xù)

4、熱缺血（室溫下靜置）25min后阻斷主動(dòng)脈，經(jīng)主動(dòng)脈根部灌注含法舒地爾的Stanford（4℃）心肌保護(hù)液（20ml/Kg），心包腔置冰屑。灌注完畢后切取供心，將其固定在Langendorff離體心臟裝置上，氧合溫血持續(xù)灌注，進(jìn)行心臟復(fù)跳、平衡；含法舒地爾的Stanford（4℃）液浸浴原位保存心臟2h；重新氧合溫血（38℃）持續(xù)灌注，心臟復(fù)跳，觀察1h結(jié)束實(shí)驗(yàn)；(二)對(duì)照組：整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中除不使用“法舒地爾”(用等量生理鹽水代替法舒地

5、爾)外，余步驟同實(shí)驗(yàn)組。在不同時(shí)點(diǎn)測(cè)定心臟血流動(dòng)力學(xué)、冠脈流量、心肌酶、心肌梗死量、心肌組織含水量、觀察心肌細(xì)胞凋亡、心肌光/電鏡下結(jié)構(gòu)改變。
　　結(jié)果：
　　兩組所有供心均能正常復(fù)跳。（1）心臟血流動(dòng)力學(xué)：供心在缺血前、平衡后，兩組間血流動(dòng)力學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；供心保存結(jié)束，復(fù)灌后30min、復(fù)灌后60min，LVEDP、LVPDP、±dp/dt有顯著差異，實(shí)驗(yàn)組心功能的恢復(fù)，優(yōu)于對(duì)照組，兩組間差異

6、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01）；（2）冠脈流量：缺血前、平衡后，兩組間冠脈流量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；復(fù)灌后30min、復(fù)灌后60min，兩組冠脈流量明顯下降，實(shí)驗(yàn)組優(yōu)于對(duì)照組，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01）；（3）心肌酶：缺血前、平衡后，兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）；復(fù)灌后30 min、復(fù)灌后60min，兩組均顯著升高，實(shí)驗(yàn)組升高幅度低于對(duì)照組，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.01）；（4）心肌組織含水量：實(shí)

7、驗(yàn)組（77.9±0.8％）明顯低于對(duì)照組（80.3±1.2%），兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01）；（5）心肌梗死量：兩組心肌各切片標(biāo)本，肉眼可見(jiàn)散在、局灶性分布的梗死病灶，實(shí)驗(yàn)組（16.0±0.2%）明顯低于對(duì)照組（25.0±0.2%），兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.01)；（6）光鏡下觀察：實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞排列規(guī)則有序,胞質(zhì)肌絲豐富；細(xì)胞核基本正常；對(duì)照組心肌細(xì)胞排列規(guī)則有序,胞質(zhì)肌絲豐富，少部分細(xì)胞核固縮、裂解；（7）電鏡下觀

8、察：實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞核呈梭形、長(zhǎng)桿狀、橢圓形，核膜清晰，常染色體呈細(xì)顆粒狀，異染色體分布在核膜內(nèi)側(cè)，肌纖維排列有序，閏盤(pán)、Z帶清晰可見(jiàn)，肌原纖維間有桿狀線(xiàn)粒體、豐富糖原顆粒，線(xiàn)粒體均勻排列，見(jiàn)清晰的線(xiàn)粒體嵴和膜，兩側(cè)肌漿網(wǎng)可見(jiàn) L小管；對(duì)照組細(xì)胞核橢圓形、不規(guī)則形，核膜清晰，肌纖維排列正常，閏盤(pán)、Z帶欠清晰，線(xiàn)粒體輕度腫脹，部分嵴溶解，糖原顆粒減少；（8）心肌細(xì)胞的凋亡指數(shù)：TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞的凋亡，實(shí)驗(yàn)組（22.2±0.8%）凋亡