CD4+白細(xì)胞介素-17+輔助性T細(xì)胞在香煙暴露肺氣腫小鼠中的作用機(jī)制研究.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩131頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、第一章香煙暴露肺氣腫小鼠CD4+白細(xì)胞介素-17+輔助性T細(xì)胞的變化及意義
  目的:觀察香煙煙霧暴露小鼠肺實(shí)質(zhì)、外周血中CD4+IL-17+輔助性T細(xì)胞(Th17)數(shù)量及轉(zhuǎn)錄因子RORγt的表達(dá)情況,以探討其在香煙誘導(dǎo)小鼠肺部炎癥及肺氣腫中的作用。
  方法:將40只雄性Balb/c小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組:對(duì)照12周組(C12)、對(duì)照24周組(C24)、煙霧暴露12周組(S12)、煙霧暴露24周組(S24),每組10只

2、。香煙煙霧暴露法建立小鼠肺氣腫模型。HE染色觀察小鼠肺氣腫的改變,計(jì)算平均內(nèi)襯間隔(Lm)和肺泡破壞指數(shù)(DI);酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)小鼠支氣管肺泡灌洗液及肺實(shí)質(zhì)中干擾素(IFN)-γ和腫瘤壞死因子(TNF)-α水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠肺實(shí)質(zhì)、外周血中CD4+IL-17+T(Th17)細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比;免疫熒光PCR法檢測(cè)小鼠肺實(shí)質(zhì)、外周血中RORγt和IL-17的mRNA表達(dá),并分析這些指標(biāo)的相互關(guān)系。
  結(jié)果:(1

3、) S12組和S24組Lm為[(39.19±3.51)μm和(46.87±7.16)μm]及DI為[(39.13±1.57)和(45.16±3.13)]均明顯高于C12組和C24組Lm[(32.60±3.21)μm和(32.38±3.73)μm]及DI[(28.23±1.62)和(28.86±2.07)],以S24組增高更為明顯,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。(2) S12組和S24組BALF中IFN-γ及TNF-α水平[(12

4、9.7±22.2)ng/L和(251.1±62.4)ng/L]及[(17.35±1.60)ng/L和(36.35±1.43)ng/L]較C12組和C24組[(85.8±26.8)ng/L和(88.9±11.5)ng/L]及[(6.41±0.90)ng/L和(5.85±0.92)ng/L]明顯增高;在肺實(shí)質(zhì)中,S12組和S24組IFN-γ及TNF-α水平[(1124.3±174.4)ng/L和(1342.7±206.1)ng/L]及[(7

5、7.2±13.7)ng/L和(101.7±19.0)]ng/L亦較C12組和C24組[(946.2±81.9)ng/L和(1027.2±188.3)ng/L]及[(62.1±16.1)ng/L和(64.4±15.1)ng/L]明顯增高;且以S24組增高更為明顯,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。(3)S12組和S24組肺實(shí)質(zhì)中Th17細(xì)胞比例[(3.27±1.12)%和(7.19±2.24)%]明顯高于C12組和C24組[(1.80

6、±0.75)%和(1.99±0.59)%]; S12組和S24組外周血中Th17細(xì)胞比例[(1.96±0.61)%,和(3.82±1.26)%]亦明顯高于C12組和C24組[(0.90±0.37)%,和(0.97±0.32)%];且以S24組增高更為明顯,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。(4) S12組和S24組肺實(shí)質(zhì)中RORγt和IL-17 mRNA表達(dá)量[(25.40±3.57)和(35.40±3.20)],[(25.50±3

7、.03)和(35.50±3.03)]較C12組和C24組[(10.00±4.83)和(11.20±7.35)],[(12.70±5.12)和(8.30±6.07)]明顯增高,以S24組增高更為明顯,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05);外周血中,S12組和S24組RORγt和IL-17 mRNA表達(dá)量[(24.90±4.63)和(35.20±3.61)],[(25.70±3.34)和(35.30±3.40)]亦較C12組和C24組[(9

8、.00±5.73)和(12.90±7.22)],[(12.10±6.59)和(8.90±4.98)]明顯增高,以S24組增高更為明顯,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。(5)煙霧暴露組中,外周血和肺實(shí)質(zhì)的Th17細(xì)胞比例均與Lm、DI值顯著正相關(guān)(r值分別為0.767、0.772;0.722、0.706,均P<0.05)。
  結(jié)論:Th17細(xì)胞在香煙暴露肺部炎癥、肺氣腫小鼠外周血及肺內(nèi)表達(dá)增高,并伴活性的增強(qiáng),且隨煙霧暴露時(shí)

9、間延長(zhǎng)而增強(qiáng),提示香煙暴露肺氣腫小鼠Th17細(xì)胞上調(diào)可能是導(dǎo)致小鼠肺內(nèi)及全身炎癥反應(yīng)放大的原因之一。
  第二章 CD4+白細(xì)胞介素-17+輔助性T細(xì)胞在香煙暴露肺氣腫小鼠中上調(diào)的相關(guān)研究
  目的:觀察香煙煙霧暴露肺氣腫小鼠肺實(shí)質(zhì)中CD4+IL-17+輔助性T細(xì)胞(Th17)及相關(guān)分子的變化,探討其在香煙暴露肺氣腫小鼠中上調(diào)的可能機(jī)制。
  方法:將40只雄性Balb/c小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組:對(duì)照12周組(C1

10、2)、對(duì)照24周組(C24)、煙霧暴露12周組(S12)、煙霧暴露24周組(S24),每組10只。香煙煙霧暴露法建立小鼠肺氣腫模型。HE染色觀察小鼠肺氣腫的改變,計(jì)算平均內(nèi)襯間隔(Lm)和肺泡破壞指數(shù)(DI);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠肺實(shí)質(zhì)中CD4+IL-17+T(Th17)細(xì)胞、CD4+IFN-γ+T(Th1)細(xì)胞、CD4+IL-17+IFN-γ+T(Th17/Th1)細(xì)胞、CD4+IL-17+CCR6+T細(xì)胞及CCR6+ Th17細(xì)胞比例

11、;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)小鼠肺實(shí)質(zhì)中的IL-1β、IL-6、IL-23、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β)、IFN-γ及CCL20水平,并分析這些指標(biāo)的相互關(guān)系。
  結(jié)果:(1) S12組和S24組小鼠Lm為[(39.19±3.51)μm和(46.87±7.16)μm]及DI為[(39.13±1.57)和(45.16±3.13)]均明顯高于C12組[(32.60±3.21)μm和(28.23±1.62)]及C24組[(32.3

12、8±3.73)μm和(28.86±2.07)],以S24組增高更為顯著(t值為4.378~15.188,均P<0.05)。(2) S12組和S24組小鼠Th17、Th17/Th1和Th1細(xì)胞比例[(3.27±1.12)和(7.19±2.24)],[(0.61±0.30)和(1.82±0.52)],[(10.02±3.68)和(26.21±6.04)]均明顯高于C12組和C24組[(1.80±0.75)和(1.99±0.59)],[(0.

13、27±0.12)和(0.28±0.11)],[(3.75±1.72)和(4.16±1.32)],且以S24組增高更為顯著(t值為3.461~13.356,均P<0.01);S12組、S24組中小鼠Th17、Th17/Th1及Th1細(xì)胞比例與Lm、DI值均顯著正相關(guān)(r值為0.706~0.877,均P<0.01)。(3) S12組和S24組小鼠CD4+IL-17+CCR6+細(xì)胞比例[(0.69±0.34)和(1.11±0.48)]明顯高于

14、C12組和C24組[(0.22±0.18)和(0.25±0.17)],以S24組增高更為顯著(t值為2.238~5.270,均P<0.05);S12組和S24組小鼠CCR6+ Th17細(xì)胞比例[(12.23±2.13)和(18.65±1.17)]高于C12組和C24組[(6.55±2.13)和(7.29±1.57)],以S24組增高更為顯著(t值為5.950~18.342,均P<0.05);煙霧暴露組小鼠CCR6+Th17細(xì)胞比例與Lm

15、和DI值顯著正相關(guān)(r值分別為0.617,0.741,均P<0.05)。(4) S12組和S24組小鼠肺實(shí)質(zhì)中IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-23、TGF-β及CCL20濃度均明顯高于C12組和C24組,以S24組增高更為顯著(t值為1.517~17.257,均P<0.01);S12組和S24組中Th17細(xì)胞比例與IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-23、TGF-β及CCL20濃度之間均呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r值為0.394~0

16、.800,均P<0.05)。
  結(jié)論:香煙暴露肺氣腫小鼠肺內(nèi)Th17、Th17/Th1和Th1細(xì)胞上調(diào),IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-23、TGF-β的升高及CCR6/CCL20趨化軸作用可能與Th17細(xì)胞上調(diào)相關(guān)。
  第三章香煙暴露肺氣腫小鼠中CD4+白細(xì)胞介素-17+輔助性T細(xì)胞對(duì)CD8+T細(xì)胞毒性功能的影響
  目的:觀察香煙煙霧暴露小鼠外周血、肺實(shí)質(zhì)中CD4+IL-17+輔助性T細(xì)胞(Th17)上

17、IL-21的表達(dá)情況,研究IL-21對(duì)CD8+T細(xì)胞功能的影響,以探討Th17細(xì)胞對(duì)香煙誘導(dǎo)肺氣腫的調(diào)節(jié)機(jī)制。
  方法:將40只雄性Balb/c小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組:對(duì)照12周組(C12)、對(duì)照24周組(C24)、煙霧暴露12周組(S12)、煙霧暴露24周組(S24),每組10只。香煙煙霧暴露法建立小鼠肺氣腫模型。HE染色觀察小鼠肺氣腫的改變,計(jì)算平均內(nèi)襯間隔(Lm)和肺泡破壞指數(shù)(DI);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠外周血、肺實(shí)質(zhì)

18、中CD4+IL-17+IL-21+細(xì)胞及CD8+IL-21R+細(xì)胞比例;分離C24組和S24組小鼠脾細(xì)胞的CD8+T細(xì)胞,分4組:對(duì)照24周IL-21共培養(yǎng)組(C24IL-21+組)、煙霧暴露24周IL-21共培養(yǎng)組(S24IL-21+組)、對(duì)照24周空白組(C24IL-21-組)及煙霧暴露24周空白組(S24IL-21-組),進(jìn)行體外培養(yǎng),通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD8+穿孔素+T細(xì)胞、CD8+粒酶B+T細(xì)胞的比例及酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)培養(yǎng)上

19、清液中穿孔素和粒酶B水平。
  結(jié)果:(1) S12組和S24組小鼠Lm為[(39.19±3.51)μm和(46.87±7.16)μm]及DI為[(39.13±1.57)和(45.16±3.13)]均明顯高于C12組[(32.60±3.21)μm和(28.23±1.62)]及C24組[(32.38±3.73)μm和(28.86±2.07)],以S24組增高更為顯著,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值為4.378~15.188,均P<0.05

20、)。(2)在外周血中,S12組和S24組小鼠CD4+IL-17+IL-21+細(xì)胞比例[(0.18±0.04)%和(0.53±0.22)%]明顯高于C12組和C24組[(0.06±0.03)%和(0.08±0.03)%],以S24組增高更為顯著,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p<0.05);S12組和S24組小鼠CD8+IL-21R+細(xì)胞比例[(2.35±0.75)%和(3.14±1.35)%]明顯高于C12組和C24組[(0.59±0.21)%

21、和(0.61±0.18)%],但S12組和S24組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05);煙霧暴露組小鼠外周血中CD4+IL-17+IL-21+細(xì)胞比例及CD8+IL-21R+細(xì)胞比例均與Lm、DI值顯著正相關(guān)(r值為0.520~0.668,均p<0.05)。在肺實(shí)質(zhì)中,S12組和S24組小鼠CD4+IL-17+IL-21+細(xì)胞比例[(0.19±0.04)%和(0.55±0.24)%]明顯高于C12組和C24組[(0.07±0.03)%和(

22、0.08±0.03)%],S24組增高更為顯著,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p<0.05);S12組和S24組小鼠CD8+IL-21R+細(xì)胞比例[(2.94±1.26)%和(4.12±2.26)%]亦明顯高于C12組和C24組[(1.22±0.31)%和(1.34±0.18)%],但S12組和S24組間差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05);煙霧暴露組小鼠肺實(shí)質(zhì)中CD4+IL-17+IL-21+細(xì)胞比例及CD8+IL-21R+細(xì)胞比例均與Lm、D

23、I值顯著正相關(guān)(r值為0.516~0.754,均p<0.05)。(3) C24IL-21+組和S24IL-21+組小鼠CD8+perforin+T細(xì)胞比例為[(58.68±7.87)和(76.06±5.19)]及CD8+granzymeB+T細(xì)胞比例為[(42.70±5.72)和(71.13±4.97)]均明顯高于C24IL-21-組[(23.28±3.41)和(20.27±3.35)]及S24IL-21-組[(29.19±6.81)和

24、(25.36±5.78)],以S24IL-21+組增高更為顯著(t值為2.409~18.987,均P<0.05);在培養(yǎng)細(xì)胞上清液中,C24IL-21+組和S24IL-21+組小鼠穿孔素的濃度為[(17.54±1.80)ng/L和(24.47±2.61)ng/L]及粒酶B的濃度為[(1.43±0.18) ng/L和(1.92±0.21)ng/L]均明顯高于C24IL-21-組[(5.23±2.02) ng/L和(0.84±0.07)ng

25、/L]及S24IL-21-組[(9.24±1.12) ng/L和(1.35±0.20) ng/L],以S24IL-21+組增高更為顯著(t值為5.502~16.950,均P<0.05);且各組穿孔素的濃度顯著高于粒酶B濃度(均P<0.05)。
  結(jié)論:香煙暴露導(dǎo)致肺氣腫小鼠外周血、肺內(nèi)CD4+IL-17+IL-21+細(xì)胞及CD8+IL-21R+細(xì)胞上調(diào),Th17細(xì)胞通過(guò)IL-21/IL-21R促進(jìn)肺部炎癥放大及組織破壞,這對(duì)探討

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論