分枝桿菌降解植物甾醇生產(chǎn)雄烯二酮的發(fā)酵研究.pdf

1、雄甾-4-烯-3，17-二酮(簡稱:雄烯二酮或AD)是甾體激素類藥物不可替代的中間體，對機體起著非常重要的調(diào)節(jié)作用。可以說幾乎所有甾體激素藥物都是以AD作為起始原料進行生產(chǎn)的。 目前，AD的生產(chǎn)方法逐漸由天然薯蕷化學提取轉(zhuǎn)向微生物發(fā)酵法。微生物發(fā)酵法生產(chǎn)AD具有不受原料資源限制、成本低、產(chǎn)量高、步驟簡單、易于大規(guī)模生產(chǎn)等特點成為AD生產(chǎn)的發(fā)展方向，因此開發(fā)先進的微生物發(fā)酵法生產(chǎn)AD的技術(shù)就顯得十分必要。 本文對微生物發(fā)酵

2、法生產(chǎn)AD進行了的探索，主要完成了以下幾個方面的工作。 建立了一套快速、準確的分析發(fā)酵液中AD的方法，主要有:TLC法、紫外分光光度法、HPLC法，為進行后續(xù)實驗提供了先決條件。 通過乙醇溶媒法、吐溫-80乳化法、環(huán)糊精包埋法、超聲波法來處理植物植物甾醇，最終選擇吐溫80高溫乳化法作為本實驗的處理方法。解決了植物甾醇在水溶液中的難溶問題。 通過300mL搖瓶水平的單因素試驗和多因素正交試驗初步確定菌株發(fā)酵培養(yǎng)基的

3、成分，即葡萄糖:20g/L、蛋白胨:20g/L、K2HPO4:0.8g/L、MgSO4·7H2O:0.7g/L、CaCO3:9g/L。 確定了菌株搖瓶發(fā)酵的適宜培養(yǎng)條件:溫度:28℃、pH:7.0、轉(zhuǎn)速:250r/min、接種量:6％、裝液量:50mL/300mL、投料是時間:0h。 確定了10L罐發(fā)酵適宜培養(yǎng)條件。在發(fā)酵罐水平上控制適于產(chǎn)物代謝的適宜溫度為28℃和pH值為7。摸索出適于產(chǎn)物積累的通氧和攪拌策略，即整個發(fā)