支氣管哮喘患者外周血T細(xì)胞共刺激分子OX40的表達(dá)及其意義的研究.pdf

1、本文研究目的：觀察哮喘患者是否存在OX40的過(guò)度表達(dá)及其與病情的相關(guān)性。實(shí)驗(yàn)材料及方法 研究材料：異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的鼠抗人OX40單克隆抗體及同型對(duì)照抗體、藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的鼠抗人CD3單克隆抗體及同型對(duì)照抗體、RPMIMedium1640液、胎牛血清、植物血凝素(PHA)、流式細(xì)胞儀專用紅細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)箱、流式細(xì)胞儀等。 研究方法：入選25例急性發(fā)作期哮喘患者(男11例，女14例，年齡48±17

2、歲)、15例緩解期哮喘患者(男7例，女8例，年齡53±12歲)及15例健康對(duì)照者(男6例，女9例，年齡40±12歲)。每個(gè)患者采外周靜脈血，體外環(huán)境下與植物血凝素(PHA)100μg/ml濃度下培養(yǎng)，于5小時(shí)及24小時(shí)后收集細(xì)胞懸液，洗滌后用熒光素標(biāo)記的單克隆抗體染色，紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD3與OX40雙陽(yáng)性細(xì)胞百分率。哮喘急性發(fā)作期患者抽血同時(shí)行哮喘控制調(diào)查問(wèn)卷(ACQ)評(píng)分、肺功能、血嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)等檢查，以PH

3、A刺激5小時(shí)后CD3與OX40雙陽(yáng)性細(xì)胞百分率與相應(yīng)指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1.1組內(nèi)比較：哮喘急性發(fā)作期患者外周血T細(xì)胞體外經(jīng)PHA刺激5h后CD3+OX40+細(xì)胞百分率為：11.07％±1.87％；刺激24h后CD3+OX40+百分率為11.26％±1.85％，組內(nèi)比較差異無(wú)顯著性意義(t=-1.956，P=0.062)。緩解期組PHA刺激5h后CD3+OX40+細(xì)胞百分率為2.03％±1.07％，PHA刺

4、激24h后CD3+OX40+細(xì)胞百分率為7.98％±2.99％，組內(nèi)比較差異有顯著性意義(t=-8.948，P＜0.01)。健康對(duì)照組PHA刺激5h后CD3+OX40+細(xì)胞百分率為2.40％±1.21％，PHA刺激24h后CD3+OX40+細(xì)胞百分率為9.42％±1.10％，組內(nèi)比較差異具有顯著性意義(t=-19.146，P＜0.01)。組間比較：PHA刺激5h后CD3+OX40+細(xì)胞百分率哮喘急性發(fā)作期組較緩解期及健康對(duì)照組均明顯增高

5、，三組比較差異具有顯著性意義(F=242.184，P＜0.01)；PHA刺激24小時(shí)后CD3+OX40+百分率三組比較差異具有顯著性意義(F=12.161，P＜0.01)。PHA刺激5h與24h后緩解期組與健康對(duì)照組比較差異均無(wú)顯著性意義(q檢驗(yàn)，PHA刺激5h后：P=0.489；PHA刺激24h后：P=0.063)。 1.2相關(guān)性分析：急性發(fā)作期患者外周血經(jīng)PHA刺激5h后CD3+OX40+細(xì)胞百分率與ACQ評(píng)分呈顯著正相關(guān)，