雞毒害艾美耳球蟲MIC5基因在大腸桿菌的重組表達(dá)產(chǎn)物抗原性分析.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、從雞毒害艾美耳球蟲孢子化卵囊中提取基因組DNA，用Oligo6.0軟件設(shè)計(jì)EnMIC-5基因特異性引物，通過PCR擴(kuò)增出1470 bp的片段，擴(kuò)增產(chǎn)物再連接到pMD18-T載體中，經(jīng)PCR擴(kuò)增、酶切鑒定和測(cè)序分析后證明所克隆的1470 bp片段核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列與GenBank中登錄的微線蛋白5基因序列的相似性分別是99.7％和99.6％。 按照pET-28(a)+載體的特點(diǎn)和克隆位點(diǎn)，用Oligo6.0軟件設(shè)計(jì)了含

2、BamH I和Xho I酶切位點(diǎn)的EnMIC-5基因的特異性表達(dá)引物，以重組pMDl8-T-EnMIC.5質(zhì)粒DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)8amH I和.Xho I雙酶切后，將外源EnMIC-5基因亞克隆到pET-28(a)+表達(dá)載體中，構(gòu)建pET-EnMIC-5重組表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，經(jīng)酶切、PCR和測(cè)序鑒定證明EnMIC-5基因正確插入到pET-28(a)+載體中。經(jīng)ITPG誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物通過SD

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