hTERT啟動(dòng)子調(diào)控hNIS基因轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細(xì)胞介導(dǎo)放射性碘治療的動(dòng)物水平研究.pdf

1、神經(jīng)膠質(zhì)瘤是人類生存預(yù)后最差的腫瘤之一，具有高病死率、低治愈率的特點(diǎn)，治療效果總是不理想。當(dāng)前腫瘤治療中研究的熱點(diǎn)問題是基因治療，放射性131I治療又是一種相對(duì)高效又安全的治療方法，因此我們?cè)O(shè)想將兩種方法聯(lián)合起來來治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤。
　　放射性131I對(duì)分化型甲狀腺癌細(xì)胞具有著高效、特異性的殺傷效果，其攝碘和貯碘的分子基礎(chǔ)在于甲狀腺細(xì)胞膜上存在著人鈉碘轉(zhuǎn)運(yùn)體(hNIS)這兩種編碼蛋白。我們?cè)O(shè)想將這兩種蛋白的編碼基因通過合適的載體重組

2、到神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)并使其在細(xì)胞表面特異性的表達(dá)，從而介導(dǎo)放射性碘治療。
　　本研究引入人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)啟動(dòng)子，擬構(gòu)建并應(yīng)用重組腺病毒作為基因轉(zhuǎn)移載體，將hNIS基因轉(zhuǎn)染入膠質(zhì)瘤細(xì)胞，同時(shí)建立神經(jīng)膠質(zhì)瘤的動(dòng)物模型，并進(jìn)一步分析hTERT靶向性引導(dǎo)hNIS在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中特異性表達(dá)的情況，評(píng)價(jià)放射性131I對(duì)膠質(zhì)瘤的殺傷效果。
　　方法
　　1、驗(yàn)證端粒酶在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)活性，通過PCR技術(shù)對(duì)hTERT

3、核心啟動(dòng)子進(jìn)行擴(kuò)增和克??；以腺病毒為載體構(gòu)建以hTERT為啟動(dòng)子的hNIS基因的重組腺病毒；進(jìn)行westonblot分析對(duì)重組腺病毒進(jìn)行鑒定。
　　2、建立U87細(xì)胞的裸鼠荷瘤模型，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)水平研究hNIS轉(zhuǎn)染后介導(dǎo)的膠質(zhì)瘤放射性核素99mTcO4-顯像、131I全身顯像、裸鼠移植瘤及其他臟器攝取131I能力及感染病毒后放射性碘治療對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤荷瘤裸鼠的治療作用
　　結(jié)果
　　1、成功構(gòu)建并鑒定了含hTERT啟動(dòng)子及

4、hNIS基因的重組腺病毒Ad-hTERT-hNIS。
　　2、成功建立U87細(xì)胞的裸鼠荷瘤模型，感染病毒Ad-hTERT-hNIS后，轉(zhuǎn)染hNIS基因的移植瘤99mTcO4-顯像、131I顯像均陽性。
　　3、對(duì)放射性核素131I顯像后的裸鼠各臟器進(jìn)行放射性計(jì)數(shù)分析，腫瘤組織的放射性計(jì)數(shù)僅次于甲狀腺組織，將腫瘤組織送病理進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析，hNIS蛋白表達(dá)陽性。
　　4、神經(jīng)膠質(zhì)瘤的放射性碘治療實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組腫

5、瘤細(xì)胞體積縮小明顯，裸鼠的中位生存期明顯延長，將放射性碘治療后的裸鼠腫瘤組織送病理，發(fā)現(xiàn)大片狀的細(xì)胞組織壞死。
　　結(jié)論
　　在膠質(zhì)瘤U87和U251中均存在端粒酶的表達(dá)，因此hTERT啟動(dòng)子可以引導(dǎo)hNIS基因在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的特異性表達(dá)。本研究將攜帶hTERT啟動(dòng)子、hNIS基因的重組腺病毒成功感染膠質(zhì)瘤細(xì)胞后，膠質(zhì)瘤細(xì)胞可以使其獲得較強(qiáng)的攝碘能力，在裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中感染腺病毒Ad-hTERT-hNIS后能成功介導(dǎo)放射性碘殺