hTERT啟動(dòng)子調(diào)控重組腺病毒介導(dǎo)的HSV-TK-GCV基因系統(tǒng)聯(lián)合放療治療人胰腺癌的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：(1)建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型。 (2)探討人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(HumanTelomerase．Reverse Transcriptase，hTERT)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的重組腺病毒介導(dǎo)單純皰疹病毒胸腺嘧啶激酶(herpes simplex virus-thymidine kinase，HSV-TK)基因(Ad-HSV-TK)結(jié)合丙氧鳥苷(gancyclovir,GCV)聯(lián)合放療對(duì)人胰腺癌的治療作用。 方法：用瘤塊移植的方

2、法建立人胰腺癌細(xì)胞株patu 8988裸鼠皮下移植瘤模型，采用hTERT啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Ad-HSV/TK經(jīng)尾靜脈注射荷瘤裸鼠后，腹腔注射GCV治療，并分別予高能x線共20GY，觀察對(duì)正常組織器官的影響，觀察腫瘤體積、相對(duì)腫瘤體積、瘤重、相對(duì)腫瘤增殖率以及腫瘤體積生長(zhǎng)變化的時(shí)間曲線，評(píng)價(jià)Ad-hTERT-TK/GCV聯(lián)合放療的抗腫瘤活性；聯(lián)合腫瘤的常規(guī)病理檢查、免疫組化染色法核增殖抗原(PCNA)檢測(cè)、腫瘤微血管免疫組化染色及微血管密度MV

3、D檢測(cè)、腫瘤組織細(xì)胞凋亡的檢測(cè)(TUNEL法)、流式細(xì)胞學(xué)方法細(xì)胞凋亡測(cè)定等檢測(cè)方法進(jìn)一步評(píng)價(jià)Ad-hTERT-TK/GCV聯(lián)合放療的抗腫瘤活性。 結(jié)果：在一定濃度的作用底物GCV存在條件下，Ad-hTERT-HSV-TK聯(lián)合放射治療抑瘤率達(dá)到86.56％；Ad-hTERT-TK/GCV和放療單獨(dú)應(yīng)用，抑瘤率分別是67.21％、59.26％；病理檢查及Ad-hTERT-HSV-TK/GCV+放療組腫瘤細(xì)胞呈稀疏分散排列，有大量片

4、狀壞死，腫瘤血管明顯減少，組織結(jié)構(gòu)紊亂，多為纖維組織所代替，部分胞漿空泡性變，胞漿淡染，染色質(zhì)疏松，部分腫瘤細(xì)胞核固縮，呈退化表現(xiàn)，其它兩治療組鏡下表現(xiàn)無(wú)．Ad-hTERT-HSV-TK/GCV+放療組明顯，對(duì)照組腫瘤HE染色見(jiàn)腫瘤為大量瘤細(xì)胞組成，排列緊密，間質(zhì)極少，細(xì)胞群邊緣不光整，腫瘤血管網(wǎng)絡(luò)豐富，腫瘤細(xì)胞邊界不清，細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞核呈多行性，細(xì)胞核大深染，核分裂像多見(jiàn)；Ad-hTERT-HSV-TK/GCV+放療、Ad-hTERT

5、-HSV-TK/GCV及單純放療治療后，各治療組裸鼠的心、肺、肝、腦、腎、脾等組織形態(tài)學(xué)觀察，與對(duì)照組裸鼠的組織形態(tài)學(xué)上無(wú)顯著區(qū)別；在Ad-hTERT-HSV-TK/GCV+放療組的腫瘤組織中，腫瘤細(xì)胞的PCNA增殖指數(shù)明顯減低，為43.6±9.8(％)，與其他兩治療組相比差異具有顯著性(P<0.05)；Ad-hTERT-HSV-TK/GCV+放療組腫瘤組織微血管密度明顯低于單獨(dú)應(yīng)用Ad-hTERT-HSV-TK/GCV組及放療組，有統(tǒng)

6、計(jì)學(xué)意義(P<0.05)：TUNEL法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡：在Ad-hTERT-HSV-TK/GCV+放療組標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)大量的棕色的凋亡細(xì)胞，凋亡指數(shù)(AI)分別為1.1±0.2(％)，與其他各組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果：Ad-hTERT-HSV-TK/GCV+放療組G1/S期細(xì)胞比例明顯高于其它組，而G2/M期細(xì)胞比例卻低于其它組，從凋亡率可以看出Ad-hTERT-HSV-TK/GCV+放療組明顯高于其它組