高精料日糧條件下反芻動物瘤胃中產(chǎn)生的組胺對肝臟炎性信號通路的影響與調(diào)控.pdf

1、在我國目前的畜牧生產(chǎn)中，牧場場主為了把奶牛的生產(chǎn)效率和奶產(chǎn)量提高，多采用高精料日糧的飼養(yǎng)方式，這種飼養(yǎng)方式會導(dǎo)致奶牛發(fā)生一系列的營養(yǎng)健康問題，如營養(yǎng)代謝病的發(fā)生，亞急性瘤胃酸中毒(Subacute ruminal acidosis，SARA)就是其中較為常見的一種。本研究以泌乳中期的荷斯坦奶牛作為試驗動物，將其分為兩組:低精料組(Low concentrate，LC)（精粗比4∶6）和高精料組（High concentrate，HC）(

2、精粗比6∶4)。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、實時熒光定量PCR（Real time Quantitative PCR）和蛋白印記法(Westen Blot)等方法研究高精料日糧條件下反芻動物瘤胃中產(chǎn)生的組胺經(jīng)血液到達肝臟后，對肝臟炎性信號通路是否有影響。研究中還將泌乳中期的奶山羊作為本試驗的另一批試驗動物，分為三組:低精料組(Low concentrate，LC)(精粗比4∶6)，高精料組（High concentrate，HC）

3、（精粗比6∶4）和綜合調(diào)控組(Comprehensivecontrol，CC)（精粗比6∶4，精料制粒，添加緩沖劑），研究綜合調(diào)控法對高精料日糧條件下瘤胃中產(chǎn)生的組胺對肝臟炎性信號通路影響的緩解作用。旨在為奶牛健康高效的飼養(yǎng)提出改進方法。
　　試驗一:高精料日糧的飼喂方式下，奶牛瘤胃內(nèi)產(chǎn)生的組胺對肝臟炎性信號通路的影響:本試驗選用12頭泌乳中期的荷斯坦奶牛做高精料日糧條件下反芻動物瘤胃中產(chǎn)生的組胺對肝臟炎性信號通路的影響試驗。隨機

4、選擇奶牛并且隨機分成2組，低精料組和高精料組。喂料后0-12h從瘤胃瘺管中采集瘤胃液樣品，測定各奶牛的瘤胃內(nèi)pH值;試驗動物屠宰后采集肝臟樣品，ELISA方法測定所采集樣品中組胺含量;實時熒光定量PCR測定肝臟組織中組胺受體表達情況;實時熒光定量PCR方法檢測肝臟組織中NF-κB，IL-1β，IL-6，TNF-α等基因的相對基因表達量;用Western Blot方法進行奶牛肝臟中NF-κBp65蛋白和p-p65(phosphorylat

5、ed p65)蛋白相對表達情況的測定。試驗結(jié)果為:通過喂食高比例精料，瘤胃內(nèi)環(huán)境明顯改變，pH值顯著降低，小于5.6和6.0的時間變長，且差異顯著;高精料日糧組奶牛肝臟中組胺的含量顯著比低精料日糧組高;高精料日糧組中組胺H1受體的相對表達量顯著比低精料組高，而H2受體表達量差異不顯著;高精料日糧組奶牛肝臟中NF-κB，IL-1β，IL-6，TNF-α等基因的相對表達量都高于低精料組奶牛;奶牛肝臟中NF-κBp65和p-p65蛋白的表達量

6、高精料顯著高于低精料組。結(jié)論:高精料日糧可以引起瘤胃pH值顯著降低，引起肝臟中組胺含量的升高，組胺H1受體表達量增加，組胺可能通過H1受體途徑激活NF-κB信號通路，從而導(dǎo)致NF-κB，IL-1β，IL-6，TNF-α等基因相對表達量的增加，NF-κBp65和p-p65蛋白表達量的增高。
　　實驗二:綜合調(diào)控法對高精料日糧條件下反芻動物瘤胃中產(chǎn)生的組胺對肝臟炎性信號通路影響的調(diào)節(jié):本試驗選取18只處于泌乳中期的奶山羊做綜合調(diào)控試驗

7、，研究綜合調(diào)控法對于高精料日糧條件下瘤胃中產(chǎn)生的組胺對肝臟炎性信號通路的調(diào)節(jié)作用。將18只試驗?zāi)躺窖螂S機分成3組，分別為低精料組、高精料組和綜合調(diào)控組。飼養(yǎng)條件相同，飼喂后0-10h從瘤胃瘺管中收集瘤胃液，pH計測定瘤胃液pH值，屠宰后取奶山羊肝臟組織樣品，ELISA方法檢測肝臟中組胺含量，實時熒光定量PCR法檢測肝臟組織中組胺H1受體和組胺H2受體基因相對表達量和炎性因子NF-κB，IL-1β，IL-6，TNF-α等的相對基因表達量，

8、Western Blot方法檢測肝臟組織中NF-κBp65蛋白和p-p65蛋白的表達情況。試驗結(jié)果為:綜合調(diào)控組奶山羊瘤胃內(nèi)pH值極顯著的高于高精料日糧組，比低精料組低但差異不顯著;肝臟中組胺濃度，綜合調(diào)控組顯著比高精料日糧組低，比低精料組略高但差異不顯著;組胺受體表達情況，綜合調(diào)控組組胺H1受體相對基因表達量顯著低于高精料組，與低精料組無差異，H2受體基因相對表達量三組無明顯差異;NF-κB，IL-1β，IL-6，TNF-α等基因的相