高精料日糧對反芻動物肝臟NOD樣受體表達的影響和調(diào)控.pdf

1、我國是人口大國，隨著近年來經(jīng)濟騰飛帶來的物質(zhì)生活水平提高，人們對乳產(chǎn)品尤其是牛奶的需求量越來越大。然而我國優(yōu)質(zhì)牧草資源匱乏，無法滿足畜牧生產(chǎn)的要求，所以為了提高奶牛泌乳期間的營養(yǎng)水平，通常在日糧中添加碳水化合物含量高的精料。高精料日糧容易導(dǎo)致亞急性瘤胃酸中毒（SARA）的產(chǎn)生，并繼發(fā)一系列營養(yǎng)代謝性疾病。SARA條件下，瘤胃內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變，部分瘤胃微生物尤其是革蘭氏陰性菌崩解產(chǎn)生脂多糖、肽聚糖等異常代謝產(chǎn)物，被吸收入血經(jīng)門靜脈進入肝臟。

2、NOD樣受體是機體天然免疫的重要組成部分，肽聚糖的分解產(chǎn)物可以被肝臟組織中NOD樣受體特異性結(jié)合，激活相應(yīng)的信號通路，誘導(dǎo)炎性反應(yīng)的發(fā)生。本試驗選用12頭泌乳中期的荷斯坦奶牛，采用pH值測量、實時熒光定量PCR(qPCR)、蛋白印跡法(Western Blot)等方法，研究高精料日糧條件對反芻動物肝臟中NOD樣受體表達的影響。此外，還選用18頭泌乳中期的奶山羊，在高精料日糧中添加緩沖劑，研究綜合調(diào)控對SARA的緩解作用以及NOD樣受體表

3、達情況的變化。本試驗主要分為兩個部分:
　　試驗一:選用了12頭處于泌乳中期的的奶牛，隨機分為兩組，分別飼喂高精料（High concentrate，HC）日糧（精粗比6∶4）和低精料(Low concentrat，LC)日糧（精粗比4∶6）來研究高精料日糧條件下，反芻動物瘤胃中肽聚糖的分解產(chǎn)物DAP和MDP對肝臟NOD樣受體信號通路的影響。奶牛在飼喂后0-12h通過瘤胃瘺管采取瘤胃液，用pH計測量瘤胃液的pH值。飼喂20周后屠宰

4、，采取肝臟組織樣品。利用實時熒光定量PCR(qPCR)對肝臟組織中的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB進行測量，并檢測IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性因子以及NOD1、NOD2受體的基因相對表達量。采用蛋白印跡法(Western Blot)檢測奶牛肝臟組織中NF-κB的p65蛋白和p-p65蛋白的表達量。比較高精料組和低精料組的差異，并分析其原因。
　　結(jié)果:飼喂后高精料組瘤胃液的pH值顯著降低，pH值小于5.6的時間更長;NF-κB的相對

5、基因表達量高精料組高于低精料組，且差異極顯著;炎性基因表達量高精料組均高于低精料組，IL-1β、IL-6差異極顯著，TNF-α差異顯著;NOD1受體的相對基因表達量高精料組明顯高于低精料組，差異極顯著;NOD2受體的相對基因表達量差異不顯著;蛋白水平上，p65和p-p65的蛋白表達量高精料組均高于低精料組，p65差異極顯著，p-p65差異顯著。
　　試驗二:試驗選用18頭泌乳中期奶山羊，在高精料日糧中加入緩沖劑進行綜合調(diào)控試驗，探

6、究綜合調(diào)控能否降低高精料日糧對SARA的影響，以及反芻動物肝臟中的NOD樣受體表達量的變化情況。將18頭實驗動物隨機分成3組，分別飼喂低精料日糧（精粗比4∶6）、高精料日糧（精粗比6∶4）、高精料日糧+緩沖劑，即低精料組、高精料組和調(diào)控組。安裝瘤胃瘺管恢復(fù)健康后，測量每天進食后0-10h瘤胃pH值。運用實時熒光定量PCR測量三組奶山羊肝臟中的NOD1、NOD2受體，轉(zhuǎn)錄因子NF-κb以及炎性因子IL-1、IL-6、TNF-α相對基因表達