MTA3過表達胃腺癌細胞株的建立及MTA3過表達對EMT的影響.pdf

1、目的：建立穩(wěn)定表達MTA3和luc2的胃癌細胞株SGC7901-pMTA3-IRES2-luc2；對比轉染MTA3對Snail、E-cadherin表達的變化，探討MTA3對胃腺癌EMT的影響。
　　方法：以pIRES2-EGFP作為模板，設計引物PCR擴增pIRES2片段，將pIRES2片段與luc2基因片段連接構建 pIRES2-luc2，將 MTA3插入到 pIRES2-luc2中構建pMTA3-IRES2-luc2共表達載

2、體，并通過單酶切、雙酶切、測序等方法對共表達載體進行鑒定；將共表達載體pMTA3-IRES2-luc2、pIRES2-luc2穩(wěn)定轉染至胃癌細胞系SGC7901，通過G418耐藥篩選及有限稀釋法篩選高表達MTA3和luc2的克隆株，并進行擴大培養(yǎng)建立穩(wěn)定表達MTA3和luc2的細胞株SGC7901-pIRES2-luc2、SGC7901-pMTA3-IRES2-luc2。擴大培養(yǎng)后提取mRNA、蛋白質，利用PCR、Western blo

3、t技術，鑒定2個細胞克隆株MTA3表達的差異；利用PCR、Western blot技術檢測Snail、E-cadherin表達，分析MTA3過表達對Snail、E-cadherin表達的影響。
　　結果：酶切、測序等結果顯示pMTA3-IRES2-luc2、pIRES2-luc2共表達載體的鑒定與預期結果完全相符，共表達載體構建成功，可用于后續(xù)實驗；利用 pMTA3-IRES2-luc2、pIRES2-luc2共表達載體質粒對SG

4、C7901細胞系進行穩(wěn)定轉染，成功建立了穩(wěn)定表達MTA3和luc2基因的細胞株SGC7901-pIRES2-luc2、SGC7901-pMTA3-IRES2-luc2；利用 PCR、Western blot等技術，鑒定2個細胞株中MTA3表達的差異，發(fā)現轉染pMTA3-IRES2-luc2組MTA3表達量明顯較對照組pIRES2-luc2組高，P值=0.000，有統(tǒng)計學意義，證明穩(wěn)定轉染細胞系建立成功； PCR、Western blot