2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、帕金森病(Parkinson's Disease,PD)的主要病理改變是中腦黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)元進行性減少,引起黑質(zhì)紋狀體系統(tǒng)多巴胺水平降低。服用左旋多巴制劑的多巴胺替代治療至今仍是最為有效的治療方法,但其遠(yuǎn)期療效欠佳,癥狀波動,異動癥以及精神癥狀長期困擾著患者和醫(yī)療人員。細(xì)胞移植是目前帕金森病治療的新方法之一,如何在體外獲得足量的多巴胺能神經(jīng)元一直是神經(jīng)科學(xué)界面臨的一個難題。胎腦移植有比較好的效果,但是由于倫理束縛和來源限制,不能

2、夠得到廣泛應(yīng)用。骨髓基質(zhì)細(xì)胞(Bone Marrow Stromal Cells,BMSCs)是骨髓內(nèi)的一種多潛能干細(xì)胞,在一定條件下,可分化為神經(jīng)細(xì)胞。它可以直接從個體骨髓中獲得,來源充足,取材方便,創(chuàng)傷小,且避免了移植技術(shù)難以逾越的移植排斥問題和倫理學(xué)的束縛,因此BMSCs定向誘導(dǎo)分化成為神經(jīng)元甚至是多巴胺能神經(jīng)元成為帕金森病研究領(lǐng)域的熱點。 骨髓基質(zhì)細(xì)胞向神經(jīng)樣細(xì)胞分化的機制還不確定。研究者認(rèn)為內(nèi)在基因機制和種系限制以及細(xì)

3、胞的命運是可塑的,環(huán)境可以引起細(xì)胞多潛能作用的發(fā)揮。神經(jīng)組織或細(xì)胞微環(huán)境可以增強:BMSCs向神經(jīng)細(xì)胞方向分化的能力。紋狀體是黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元主要投射部位,是黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元發(fā)揮生理作用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。動物實驗已證實將BMSCs移植到紋狀體,能夠改善帕金森病大鼠或小鼠的行為。其可能作用機制是:BMSCs具有分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子的功能;BMSCs注入紋狀體后,在局部微環(huán)境的作用下分化為神經(jīng)細(xì)胞,如膠質(zhì)細(xì)胞、多巴胺能神經(jīng)元等。又有體外實驗表明紋

4、狀體提取液對多巴胺能神經(jīng)元有促進存活的作用,對細(xì)胞的分化有促進作用,還可以促進細(xì)胞突觸生成。在進化的過程中,哺乳動物繼承了多方面的機制以保護自己應(yīng)對外來侵犯。帕金森病患者腦內(nèi)DA能神經(jīng)元70-80%丟失仍能保持正常運動,提示著一種自我保護機制。我們設(shè)想,帕金森大鼠紋狀體提取液可以促進BMSCs向神經(jīng)細(xì)胞方向分化,甚至分化為多巴胺能神經(jīng)元。我們進一步設(shè)想正常紋狀體(正常側(cè))提取液和:PD紋狀體(損傷側(cè))提取液兩者問具有誘導(dǎo)作用上的差異。因

5、此,我們進行了帕金森大鼠紋狀體提取液誘導(dǎo)BMSCs的嘗試,以期利用紋狀體的生理作用以及紋狀體提取液對細(xì)胞的促分化作用和對多巴胺能神經(jīng)元的保護作用,誘導(dǎo)BMSCs分化成為神經(jīng)細(xì)胞甚至是多巴胺能神經(jīng)元。同時比較正常紋狀體提取液與PD紋狀體提取液作用上的可能差異性。 本實驗研究的目的:利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),為BMSCs紋狀體移植治療帕金森病的機制提供直接依據(jù)。具體實驗步驟:1,幼年大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)擴增與生物性狀觀察;2,帕金森大鼠

6、紋狀體提取液對骨髓基質(zhì)細(xì)胞的誘導(dǎo)作用。 第一部分幼年大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)與觀察 目的:體外分離培養(yǎng)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞,通過超微結(jié)構(gòu)觀察和免疫組織化學(xué)檢測探討細(xì)胞生物學(xué)特性。 方法:收集幼年大鼠骨髓細(xì)胞,利用貼壁培養(yǎng)法純化擴增。培養(yǎng)細(xì)胞至第三代,相差顯微鏡及HE染色,掃描電鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞生長狀態(tài)和細(xì)胞形態(tài);免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測細(xì)胞表面神經(jīng)標(biāo)記物巢蛋白(Nestin),神經(jīng)特異性烯醇化酶(neuron spe

7、cial enolase,NSE),膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)。 結(jié)果:電鏡下細(xì)胞表面見大量微絨毛結(jié)構(gòu),一些細(xì)胞有單個或多個突起樣結(jié)構(gòu)。多數(shù)細(xì)胞膜完整,胞漿內(nèi)存在豐富的細(xì)胞器;胞核大而明顯,染色質(zhì)分布正常;細(xì)胞間連接較少,可見縫隙連接。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein,GFAP)陽性細(xì)胞15.05±3.

8、92%。 結(jié)論:貼壁培養(yǎng)法是體外培養(yǎng)大鼠BMSCs的穩(wěn)定可靠的方法體系。第三代大鼠BMSCs具有生長旺盛,增值能力強,分化程度低的特點;部分細(xì)胞可表達(dá)GFAP。 第二部分帕金森大鼠紋狀體提取液對骨髓基質(zhì)細(xì)胞的誘導(dǎo)作用 目的:探討帕金森大鼠紋狀體提取液在體外誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞的可能。 方法:建立單側(cè)(右側(cè))帕金森病大鼠模型,取出雙側(cè)紋狀體分別制成正常紋狀體(正常側(cè))提取液與PD紋狀體(損傷側(cè))提

9、取液,制成不同濃度含紋狀體液的無血清培養(yǎng)基(誘導(dǎo)液)。收集幼年大鼠骨髓細(xì)胞,利用貼壁培養(yǎng)法純化擴增獲取三代細(xì)胞進行實驗。MTT法分別檢測不同濃度紋狀體誘導(dǎo)液對BMSCs生長狀態(tài)的影響。取10%,60%,90%誘導(dǎo)液(共六組)培養(yǎng)BMSC,相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)和細(xì)胞形態(tài)變化。于48小時后收集誘導(dǎo)后的細(xì)胞,免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測細(xì)胞表面神經(jīng)標(biāo)記物巢蛋白(Nestin),神經(jīng)特異性烯醇化酶(neuron specialenolase,N

10、SE),膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP),酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH),計數(shù)陽性率。 結(jié)果:相差顯微鏡下,部分細(xì)胞脫落,不再貼壁生長,懸浮于培養(yǎng)液中。仍然貼壁的細(xì)胞失去原有圓形或梭形外觀,為不規(guī)則的多邊形或長棒狀。有的細(xì)胞團簇樣存在,向四周伸出輻射狀或長或短的較粗的刺狀突起,還有的細(xì)胞單個薦在,胞體不規(guī)則,向周圍伸出單個或多個細(xì)長的突起

11、樣結(jié)構(gòu)。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示,誘導(dǎo)后正常紋狀體誘導(dǎo)液10%濃度組NSE陽性率為3.25±2.37%,GFAP陽性率為48.44±29.47%;60%濃度組NSE陽性率為20±8.62%,GFAP陽性率為54.60±33.14%;兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異。PD紋狀體誘導(dǎo)液10%濃度組Nestin陽性率為12.23±5.57%,GFAP陽性率為55.56±30.23%;60%濃度組Nestin陽性率為11.92±4.01%,GFAP陽性率為55.

12、56±30.23%;兩組間亦沒有統(tǒng)計學(xué)差異。各誘導(dǎo)組TH表達(dá)均為陰性。 結(jié)論:帕金森大鼠紋狀體提取液可以引起B(yǎng)MSCs形態(tài)學(xué)改變。與第三代BMSCs相比,誘導(dǎo)后GFAP陽性細(xì)胞顯著增多,同時出現(xiàn)NSE,Nestin陽性細(xì)胞。 總論1.貼壁培養(yǎng)法是體外培養(yǎng)大鼠BMSCs的穩(wěn)定可靠的方法體系。第三代幼年大鼠BMSCs具有生長旺盛,增值能力強,分化程度低的特點;部分細(xì)胞表達(dá)GFAP。 2.帕金森大鼠紋狀體提取液可以引起

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