IL-6、IL-10、IL-18、IFN-γ等在兒童噬血細(xì)胞綜合征中的檢測意義.pdf

1、目的：
　　通過對細(xì)胞因子組合和穿孔素基因的檢測，探討細(xì)胞因子及穿孔素基因?qū)和裳?xì)胞綜合征的診斷價(jià)值，并分析治療前后細(xì)胞因子的變化，探討細(xì)胞因子在兒童噬血細(xì)胞綜合征的臨床嚴(yán)重程度及預(yù)后方面的價(jià)值，以期待為兒童噬血細(xì)胞綜合征的診斷、治療及預(yù)后等方面提供一定的依據(jù)。
　　方法：
　　1、對象:
　　2011年9月1日～2013年3月31日期間我科收治的20例HPS患兒，所有患兒符合2004年國際組織細(xì)胞協(xié)會HPS

2、研究小組公布的診斷標(biāo)準(zhǔn)。以正常體檢兒童20例作為正常對照組，再選擇了緩解期急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)18例和膿毒癥患兒22例血清作為對照組。后三組對照組與實(shí)驗(yàn)組之間年齡和性別間比較無顯著性差異(p＞0.05)。
　　2、方法:
　　全部病例均符合2004年國際組織細(xì)胞協(xié)會HPS研究小組公布的診斷標(biāo)準(zhǔn)，符合以下8項(xiàng)中的5項(xiàng):(1)發(fā)熱;(2)脾大;(3)血細(xì)胞減少（外周血象累及兩系或三系）:血紅蛋白＜90g/L(新生兒Hb＜

3、100 g/L)，血小板＜100×109/L，中性粒細(xì)胞＜1.0×109/L;(4)高甘油三酯血癥和/或低纖維蛋白原血癥:甘油三酯≥2.0mmo/L或≥正常均值的3SD，纖維蛋白原≤1.5g/L(或≤3SD);(5)NK細(xì)胞活性降低或缺如;(6)血清鐵蛋白≥500 mg/L;(7)可溶性CD25(即可溶性IL-2受體)升高(≥2400U/ml);(8)骨髓/脾臟/淋巴結(jié)中見噬血細(xì)胞現(xiàn)象，無惡性腫瘤的證據(jù)。
　　通過流式細(xì)胞儀流式微

4、球術(shù)(Cytometric Bead Assay，CBA)快速定量檢測血清細(xì)胞因子IL-6、IL-10、IL-18、TNF-α和IFN-γ水平。
　　采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增PRF1基因外顯子及其側(cè)翼內(nèi)含子區(qū)片斷進(jìn)行篩查。
　　結(jié)果：
　　1、20例HPS患兒中，男12例，女8例，年齡2月-13歲6月，中位年齡4歲，死亡1例，復(fù)發(fā)1例。
　　2、HPS患兒診斷時(shí)各細(xì)胞因子水平與正常對照組比較: IL-6(6

5、4.72±63.78pg/mlvs2.01±1.47pg/ml)，有顯著性差異(p＜0.05); IL-10(354.63±446.88pg/ml vs3.66±1.29pg/ml)，有顯著性差異(p＜0.05); IL-18(181.24±54.12pg/ml vs61.70±17.86pg/ml)，有顯著性差異(p＜0.05); IFN-γ(3640.23±1974.76pg/mlvs47.13±15.45pg/ml，有顯著性差異(

6、P＜0.05); TNF-a(4.15±6.38pg/ml vs1.93±1.19pg/ml)，無顯著性差異(p＞0.05)。
　　3、HPS患兒中EBV感染與非EBV感染的細(xì)胞因子比較:
　　IL-6(85.22±66.15pg/ml vs16.88±12.52pg/ml)，有顯著性差異(p＜0.05);IL-10(487.71±477.55pg/ml vs44.1±25.06pg/ml)，有顯著性差異(p＜0.05);I

7、L-18(204.19±45.52pg/ml vs127.70±28.82pg/ml)，有顯著性差異(p＜0.05);IFN-γ(5000±0.00pg/ml vs728.3±932.15pg/ml)，有顯著性差異(P＜0.05);TNF-a(4.15±6.38pg/ml vs10.42±62.50pg/ml)，無顯著性差異(p＞0.05)。
　　4、HPS患兒與正常對照、ALL患兒及膿毒癥患兒的細(xì)胞因子水平比較:雖然HPS患兒的

8、IL-6(64.72±63.78pg/ml)水平較正常兒童(2.01±1.47pg/ml)亦有升高，有顯著性差異(P＜0.05)，但在膿毒癥患兒中IL-6(567.38±390.66pg/ml)有更加明顯的增高，與HPS患兒相比具有顯著性差異(P＜0.05); HPS患兒的IL-10(354.63±446.88)明顯較正常對照(3.66±1.29pg/ml)、急性白血病患兒(4.08±1.20pg/ml)及膿毒癥病例(60.69±86.

9、22pg/m)，且均有顯著性差異(p＜0.05); IFN-γ(3640.23±1974.76pg/ml)顯著高于正常對照(47.13±15.45pg/ml)、急性白血病患兒(57.75±18.52pg/ml)及膿毒癥病例(149.37±30.41pg/ml)，且均有顯著性差異(p＜0.05);HPS患兒的IL-18(181.24±54.12pg/ml)水平較正常兒童(61.70±17.86pg/ml)亦有升高，有顯著性差異(P＜0.0

10、5)，但在ALL患兒中IL-18(208.89±31.65pg/ml)有更加明顯的增高，與HPS患兒相比具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　5、HPS患兒治療前后細(xì)胞因子水平比較:治療前的IL-6、IL-10、IL-18及IFN-γ(64.72±63.78、354.63±446.88、181.24±54.12、3640.23±1974.76)Pg/ml，均明顯高于治療后水平（6.54±6.42、43.96±54.32、168.6

11、8±47.47、300.84±387.52）Pg/ml，P值分別為0.000、0.002、0.012、0.000均有顯著性差異。TNF-α雖統(tǒng)計(jì)有顯著性差異，但是治療前（13.25±21.84）比治療前（4.15±6.38）高，對臨床無指導(dǎo)意義。
　　6、從外周血提取DNA，然后采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)的方式擴(kuò)增PRF1基因的外顯子和內(nèi)含子區(qū)的片段進(jìn)行篩查。本研究對20例HPS患兒進(jìn)行了 PRF1基因突變篩查，未發(fā)現(xiàn)錯(cuò)義突變。<

12、br>　　結(jié)論:
　　1、細(xì)胞因子IL-6、IL-10、IL-18及IFN-γ水平在HPS診斷時(shí)較正常兒童明顯升高，統(tǒng)計(jì)有顯著性差異，其測定對HPS的診斷具有一定的意義。
　　2、化療可以使絕大部分患兒獲得緩解，細(xì)胞因子IL-6、IL-10、IL-18及IFN-γ水平也隨之明顯下降，統(tǒng)計(jì)有顯著性差異，其測定對HPS的預(yù)后具有一定的指導(dǎo)意義，進(jìn)一步證實(shí)HPS-2004治療方案的有效性。
　　3、EBV-HPS患兒中細(xì)胞因