CD38基因缺失對巨噬細(xì)胞遷移及其炎癥因子釋放的影響及機(jī)制研究.pdf

1、背景與目的:
　　炎癥反應(yīng)在多種疾病尤其是慢性疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用,如心血管疾病、癌癥、糖尿病等。引起炎癥反應(yīng)的原因很多,其中巨噬細(xì)胞的激活及其所引起的多種炎癥因子如MCP-1、TNF-α、IL-1β等表達(dá)量增加起著重要作用。CD38蛋白分子是一種雙功能酶,該酶同時具有環(huán)化酶和水解酶活性。它在細(xì)胞內(nèi)以NAD+為底物合成cADPR,同時可以催化cADPR形成ADPR,以此調(diào)節(jié)NAD+的濃度。一般認(rèn)為,CD38是哺乳類細(xì)胞N

2、AD+的主要代謝酶。本實(shí)驗(yàn)室的前期工作發(fā)現(xiàn),CD38基因缺失可顯著增加高脂飲食誘導(dǎo)小鼠動脈粥樣硬化時的巨噬細(xì)胞侵潤。本論文通過觀察CD38對巨噬細(xì)胞遷移,檢測炎癥相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子FOXO1、NF-кB的表達(dá),探討CD38基因缺失在巨噬細(xì)胞所參與的炎癥過程中的作用,并闡明其在炎癥反應(yīng)中可能的分子機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　1.原代巨噬細(xì)胞的提取與培養(yǎng):體外分離培養(yǎng)小鼠骨髓單核細(xì)胞,經(jīng)7天體外誘導(dǎo)出高純度(大于90％)的巨噬細(xì)胞用

3、于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　2.巨噬細(xì)胞的遷移:通過劃痕實(shí)驗(yàn)及transwell實(shí)驗(yàn)檢測實(shí)驗(yàn)組CD38-/-與對照組WT巨噬細(xì)胞遷移情況。
　　3.巨噬細(xì)胞基因及細(xì)胞因子的分泌:1)利用免疫熒光檢測CD38基因缺失對FOXO1核轉(zhuǎn)移影響;2)利用Elisarray檢測M1型細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β及M2型細(xì)胞因子IL10、IFN蛋白分泌情況,同時利用Western Blot技術(shù)對MCP-1、FOXO1、TLR4、NF-κB、Cc

4、r2蛋白表達(dá)量進(jìn)行檢測。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　1、利用免疫熒光檢測小鼠巨噬細(xì)胞特異性標(biāo)記F4/80陽性率較高,細(xì)胞純度較高滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　2、CD38基因缺失促進(jìn)巨噬細(xì)胞的遷移。
　　3、CD38基因缺失促進(jìn)FOXO1核轉(zhuǎn)移和炎癥相關(guān)蛋白MCP-1、TLR4、NF-κB的表達(dá)以及M1型細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β蛋白分泌,對M2型細(xì)胞因子IL10、IFN無影響。
　　4、CD38基因缺失促進(jìn)單核細(xì)胞趨