Trihydrophobin 1相互作用蛋白以及Trihydrophobin 1與乳腺癌細(xì)胞化療藥物敏感性之間關(guān)系的研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文Trihydrophobin 1相互作用蛋白以及Trihydrophobin 1與乳腺癌細(xì)胞化療藥物敏感性之間關(guān)系的研究姓名：楊延鐘申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：顧建新20070401復(fù)旦大學(xué)2 0 0 7 屆博士畢業(yè)論文第一部分人類乳頭瘤病毒E 6 相關(guān)蛋f l ( E 6 ．A P ) 介導(dǎo)T r i h y d r o p h o b i n1 的泛素．蛋白酶體降解摘要入類乳頭瘤病毒E

2、6 相關(guān)蛋白E 6 - A P 是泛素連接酶的一種，它能夠介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)一系列蛋白質(zhì)的泛素化降解。我們的研究發(fā)現(xiàn)T H l ，作為一個(gè)負(fù)性轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子復(fù)合體( N E L Fc o m p l e x ) 中必不可少的組分之一，能夠與E 6 - A P 相互作用，并且可以作為F A ．A P 調(diào)節(jié)的泛素化降解的新的底物。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞內(nèi)過(guò)表達(dá)E 6 - A F 可以產(chǎn)生表達(dá)劑量依賴的T H I 蛋白水平的降低，同時(shí)采用R N A 干擾技

3、術(shù)，降低細(xì)胞內(nèi)源性E 6 - A P 的表達(dá)能夠增加細(xì)胞內(nèi)T i l l 的蛋白水平。與對(duì)照組比較，過(guò)表達(dá)E 6 - A P 的細(xì)胞株中T H l 蛋白降解加快同時(shí)半衰期明顯縮短。野生型的E 6 - A P 可以明顯的促進(jìn)T H l 蛋白的泛素化降解，而E 6 ．A P 蛋白H E C T 結(jié)構(gòu)域點(diǎn)突變產(chǎn)生的泛素連接酶活性缺失的突變體卻不能泛素化T H l 蛋白。體外泛素化實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步說(shuō)明了E 6 - A P 在體外重組的泛素化系統(tǒng)中，同

4、樣可以促進(jìn)T H I 蛋白的泛素化，并且在此系統(tǒng)中加入蛋白酶體抑制劑M G l 3 2 可以阻斷E 6 ．A P 對(duì)T H l 蛋白的這種泛素化降解。因此，我們的實(shí)驗(yàn)證實(shí)T H l 蛋白的確是E 6 - A P 這個(gè)經(jīng)典的泛素連接酶的新的特異性底物。關(guān)鍵詞：T H l ／E 6 - A P ／相互作用／泛素似降解縮略詞；T H l ，t r i h y d r o p h o b i n 1 ；E 1 ，泛素活化酶；E 2 ，泛素共軛酶