腦紅蛋白對創(chuàng)傷性腦損傷的保護作用研究.pdf

1、腦紅蛋白(Ngb)是2000年被發(fā)現(xiàn)的人體內(nèi)第三類攜氧球蛋白，主要位于腦組織內(nèi)。隨即人們對它是否對腦缺血缺氧性損害有保護作用及其作用機理產(chǎn)生強烈興趣并進行了深入研究。目前多個研究顯示：在腦缺血/缺氧時Ngb的表達升高，而且通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)使腦內(nèi)Ngb表達升高后可以顯著減小腦梗死體積，這表明Ngb對腦缺血缺氧性損傷有保護作用。然而至今未見關(guān)于Ngb是否對創(chuàng)傷性腦損傷有保護作用的研究報道。 本課題的目的在于應(yīng)用重組Ngb腺病毒載體使大

2、鼠腦內(nèi)高表達Ngb，通過觀察大鼠腦創(chuàng)傷后的病理變化，探討Ngb對創(chuàng)傷性腦損傷有無保護作用。 第一部分，成功建立硬膜外撞擊中度局灶性腦損傷模型，觀察損傷后的病理變化并證實傷灶周圍皮質(zhì)及同側(cè)海馬CA1區(qū)Ngb的表達升高，確定上述區(qū)域為重點觀察對象。 第二部分，對重組腺病毒載體在大鼠腦內(nèi)的轉(zhuǎn)導效率進行研究，考察它能否有效轉(zhuǎn)染傷灶周圍皮質(zhì)及海馬．結(jié)果顯示：腺病毒注射在胼胝體通過逆軸漿運輸可以高效轉(zhuǎn)柒傷側(cè)皮質(zhì)神經(jīng)元；通過多點注射可

3、以使傷側(cè)CA1區(qū)全部被轉(zhuǎn)染，表明腺病毒載體可以滿足實驗要求。 第三部分，建立重組Ngb腺病毒載體，并通過細胞培養(yǎng)和動物實驗，應(yīng)用PCR、免疫組織化學和Western Blot技術(shù)證明它能高效轉(zhuǎn)染細胞或大鼠腦組織且正確表達Ngb。 第四部分，將重組Ngb腺病毒載體立體定向注入腦內(nèi)，使Ngb高表達，然后施以大鼠局灶性中度腦損傷。結(jié)果顯示：損傷灶體積較對照組明顯減??；傷側(cè)海馬CA1區(qū)細胞丟失減少；凋亡細胞數(shù)明顯減少。