三種形式腫瘤抗原負載的臍血樹突狀細胞體外誘導(dǎo)抗卵巢癌免疫反應(yīng).pdf

1、目的:制備人卵巢癌細胞系HO-8910細胞的凍融物、弱酸洗脫肽和總RNAN,用于負載臍血樹突狀細胞(dendritic cells DCs),觀察負載腫瘤抗原的DCs體外激活異體混合T淋巴細胞效應(yīng)和激活的細胞毒性T細胞(cytotoxic T lymphocyte CTL)對卵巢癌細胞的殺傷效應(yīng).尋找最佳的臍血樹突狀細胞負載抗原方式,激發(fā)高效的抗卵巢癌免疫反應(yīng),為進一步的動物實驗和臨床試驗奠定基礎(chǔ),從而為卵巢癌的生物治療提供新的思路.材

2、料和方法:采集健康足月妊娠孕婦的臍帶血,以淋巴細胞分離液分離臍血單個核細胞(cord blood mononuclear cell CBMNC),將其中貼壁細胞在細胞因子rhGM-CSF2000u/ml、rhIL-4 500u/ml及rhTNF-α100u/ml的配伍作用下誘導(dǎo)分化為DCs.反復(fù)凍融法制備人卵巢癌細胞系HO-8910腫瘤細胞的凍融物,PH為3.3的枸櫞酸-磷酸鹽緩沖液洗脫腫瘤細胞表面與MHC-I類分子結(jié)合的抗原肽以及超絕

3、UNIQ-10柱總RNA抽提試劑盒抽提腫瘤細胞總RNA,用其作為卵巢癌抗原負載DCs.<'3>H-TdR摻入法測定三種形式腫瘤抗原負載的DCs對異體外周血混合T淋巴細胞的體外活化效應(yīng).MTT法檢測活化的CTL對人卵巢癌細胞系HO-8910腫瘤細胞的殺傷作用.結(jié)論:CBMNC可以在GM-CSF、IL-4和TNF-α的作用下體外誘導(dǎo)分化為功能性DCs.反復(fù)凍融法,PH為3.3的枸櫞酸-磷酸鹽緩沖液洗脫法以及超絕UNIQ-10柱總RNA抽提試