健康婦女陰道乳桿菌的分離及鑒定.pdf

1、目的:從健康體檢婦女生殖道中分離乳桿菌，為開發(fā)復方益生菌制劑提供新型菌株并為臨床通過表達各種重組乳桿菌以治療女性生殖系統(tǒng)疾病尋找理論依據(jù)做好前期準備工作。
　　 方法：采用傳統(tǒng)方法鑒定乳桿菌，包括：革蘭氏染色陽性、過氧化氫酶試驗陰性、菌體形態(tài)為桿狀的菌株可初步確定為乳桿菌；再通過生長溫度試驗(15℃，45℃)、運動性試驗、硝酸鹽還原試驗、明膠液化試驗、吲哚(靛基質)試驗、硫化氫試驗將疑似株菌鑒定為乳桿菌屬；碳水化合物發(fā)酵產(chǎn)酸試驗

2、對乳桿菌進行種的鑒定。進一步篩選出產(chǎn)生過氧化氫的優(yōu)勢菌株，并運用16SrRNA序列分析方法，對其進行基因型鑒定。并對優(yōu)勢菌進行初步的性能鑒定試驗，其中包括：生長試驗、不同培養(yǎng)時間發(fā)酵液pH的變化情況、菌株對溫度的敏感性試驗、耐酸性菌株的初步篩選、乳桿菌體外拮抗試驗、抗生素敏感實驗、代謝產(chǎn)物的熱穩(wěn)定性試驗。此外對優(yōu)勢菌株進行質粒的檢測。
　　 結果：從18名體檢女性陰道分泌物內(nèi)分離純化得到11株菌，檢出率為61.1％。11株菌鑒定

3、得到5種乳桿菌，分別為嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)4株，格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)3株，詹氏乳桿菌(Lactobacillus jensenii)2株，卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、唾液乳桿菌(Lactobacillus salivaius)各1株。通過試驗得到1株產(chǎn)生過氧化氫的優(yōu)勢乳桿菌，并通過分子生物學技術得出該菌株與卷曲乳桿菌的同源性