應(yīng)用染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)研究HCMV即刻早期蛋白IE1與染色質(zhì)DNA的作用.pdf

1、[目的]: 建立有效的染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)技術(shù)和隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RAPD) 分析方法，并利用ChIP—RAPD分析方法篩選與人巨細(xì)胞病毒(HCMV)即刻早期蛋白IEl作用的宿主細(xì)胞染色質(zhì)DNA。 [方法]: 用感染復(fù)數(shù)(MOI)值=5.8的HCMV ADl69病毒液感染人胚肺成纖維細(xì)胞(HEL)細(xì)胞。用甲醛溶液分別交聯(lián)固定感染后2h、4h的IEl蛋白-DNA復(fù)合體。利用IEl的單克隆抗體通過ChIP技術(shù)

2、分別處理該復(fù)合體，純化回收ChIP產(chǎn)物，并經(jīng)RAPD PCR篩選具有共同特異性的未知DNA序列。純化回收篩選出來的未知DNA序列，通過TA克隆和藍(lán)白篩選處理后，利用通用引物測(cè)序確定DNA序列，并進(jìn)行同源性分析和外顯子預(yù)測(cè)，推斷可能編碼的蛋白。 [結(jié)果]: 結(jié)果顯示，HCMV感染后2h和4h， ChIP產(chǎn)物經(jīng)不同隨機(jī)引物擴(kuò)增后存在約800bp和600bp的共同特異性產(chǎn)物；經(jīng)克隆測(cè)序后進(jìn)行核苷酸序列分析顯示，此兩條DNA序列與已知人