苯扎貝特對PBC患者外周血單核細(xì)胞的作用研究.pdf

1、原發(fā)性膽汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis，PBC)是機(jī)體免疫耐受失控、自身免疫應(yīng)答過高引起的肝臟自身免疫性疾病。熊去氧膽酸(Ursodeoxycholic acid，UDCA)是目前治療PBC的一線藥物，但仍有一部分患者對UDCA無應(yīng)答。越來越多的臨床報(bào)告顯示苯扎貝特(Bezafibrate，BF)以其良好的治療效果和較小的副作用開始走進(jìn)臨床PBC患者的治療中，但其對于PBC疾病的具體作用機(jī)制尚缺乏系統(tǒng)的研

2、究。
　　固有免疫是機(jī)體防御及獲得性免疫應(yīng)答的基礎(chǔ)，單核細(xì)胞作為其中主要的效應(yīng)細(xì)胞，以其特有的表型特征及功能特點(diǎn)在PBC的發(fā)病過程中擔(dān)任著重要的角色，我們前期對PBC患者外周血單核細(xì)胞的研究結(jié)果顯示PBC中存在單核細(xì)胞亞群的失衡，其與肝損傷、炎癥指標(biāo)及Th1細(xì)胞的分化均密切相關(guān)。因此，BF能否作用于單核細(xì)胞上，從機(jī)體過度免疫應(yīng)答觸發(fā)的早期阻止PBC的進(jìn)一步發(fā)展？目前還沒有相關(guān)的研究報(bào)道。
　　目的:
　　觀察BF對PB

3、C患者外周血中單核細(xì)胞表型和功能的影響，及BF是否能通過調(diào)控單核細(xì)胞從而進(jìn)一步影響CD4+T細(xì)胞分化，并且探討其潛在的分子機(jī)制，為BF抗PBC的研究提供一個(gè)新的視角和實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　方法:
　　1.采集PBC患者外周血20ml，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral bloodmononuclear cell，PBMC)，進(jìn)一步分選出CD14+單核細(xì)胞，以不加藥處理作為對照組，其余分別加入不同濃度的BF(50μ M、1

4、00μ M、200μ M)培養(yǎng)48h，RT-PCR技術(shù)檢測CD16、TNF-α、IL-1β、IL-6各mRNA水平的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測單核細(xì)胞CD16、CD80、CD86和HLA-DR的表達(dá)頻率及細(xì)胞凋亡情況。
　　2.分離PBC患者的PBMC，從中分選出CD14+單核細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞，將BF預(yù)處理組與未經(jīng)BF處理的CD14+單核細(xì)胞分別與CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)，流式細(xì)胞術(shù)檢測IFN-γ+CD4+T(Th1)細(xì)胞、IL-17+

5、CD4+T(Th17)細(xì)胞比例及Ki-67+CD4+T細(xì)胞頻率;采用Transwell細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)重復(fù)上述共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，流式細(xì)胞術(shù)檢測Th1細(xì)胞頻率;RT-PCR檢測BF作用下單核細(xì)胞中IL-12p35、IL-12p40和IL-18各mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.BF在本實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)對PBC患者外周血中單核細(xì)胞無明顯的細(xì)胞毒性(P＞0.05):
　　2.BF呈濃度依賴性抑制PBC患者單核細(xì)胞上CD16的mR

6、NA水平和蛋白水平(P＜0.05)，尤其在200uM的BF干預(yù)濃度下，二者的抑制率分別為44％和58％;
　　3.BF呈濃度依賴性抑制PBC患者單核細(xì)胞促炎因子，如TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平(P＜0.01)，在200μ M濃度的處理下，其抑制程度分別為49％、53％和42％;
　　4.各濃度BF對PBC患者單核細(xì)胞共刺激分子，如CD80、CD86和HLA-DR的表達(dá)無明顯影響(P＞0.05);
　　

7、5.各濃度BF處理下，單核細(xì)胞均沒有發(fā)生明顯的凋亡現(xiàn)象(P＞0.05);
　　6.BF不能通過調(diào)控單核細(xì)胞而間接影響CD4+T細(xì)胞的增殖(P＞0.05);
　　7.BF通過調(diào)控單核細(xì)胞而間接抑制Th1細(xì)胞的分化(P＜0.05)，但對Th17細(xì)胞分化無影響(P＞0.05);
　　8.對于Th1細(xì)胞的分化情況，無論是對照組還是BF預(yù)處理組，直接接觸與間接接觸的共培養(yǎng)方式均沒有明顯的差異(P＞0.05)，兩種培養(yǎng)方式下的BF

8、均可通過調(diào)控單核細(xì)胞抑制Th1細(xì)胞的分化(P＜0.05);
　　9.BF抑制PBC患者單核細(xì)胞中IL-12p40和IL-18的mRNA表達(dá)水平(P＜0.01)，而不影響IL-12p35 mRNA(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　BF呈濃度依賴性抑制PBC患者外周血單核細(xì)胞CD16及促炎癥因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）的表達(dá)，且BF可能通過降低單核細(xì)胞分泌的可溶性分子（IL-12p40和IL-18）進(jìn)一步間接