鼠聲帶損傷動物模型的建立及修復(fù)早期聲帶Ⅲ型膠原和纖維粘連蛋白的表達(dá).pdf

1、背景和目的： 繼發(fā)于感染、損傷和外科手術(shù)的聲帶瘢痕(vocal fold scar)是聲帶受損后引起音質(zhì)改變的主要原因.研究提示:聲帶瘢痕一般發(fā)生在聲帶的固有層(1amina propria,LP).聲帶固有層主要由纖維蛋白、糖蛋白和蛋白多糖等多種細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)組成,細(xì)胞外基質(zhì)組成物的含量、性質(zhì)及各組成物之間的相互作用對正常聲帶生物機(jī)械特性的維持具有重要意義.本實驗使用大鼠構(gòu)建聲帶

2、機(jī)械損傷動物模型,運(yùn)用免疫組化染色,觀察修復(fù)早期不同時間聲帶固有層中Ⅲ型膠原(collagen Ⅲ)和纖維粘連蛋白(fibronect in,FN)的表達(dá)及分布變化規(guī)律. 材料和方法: 4-6個月的SD大鼠45只,雌雄不限,平均體重約420g.實驗組40只在直徑1.9mm鼻內(nèi)窺鏡的輔助下,行雙側(cè)聲帶表面被覆層剝脫術(shù),術(shù)后死亡4只,將存活的36只隨機(jī)分為A、B、C、D4組,平均每組9只,于術(shù)后不同時間(3天、5天、7天、1

3、4天)獲取全喉標(biāo)本.5只為正常對照E組,在實驗之初即處死獲取全喉標(biāo)本.所有標(biāo)本經(jīng)10﹪中性甲醛固定,石蠟包埋,4μm連續(xù)切片,用免疫組化染色檢測Ⅲ型膠原和纖維粘連蛋白的表達(dá),采用HPIAS-100高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)將染色不同深淺度轉(zhuǎn)化為灰度數(shù)值,作定量檢測.將上述四個實驗組所得灰度數(shù)值及對照組進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,統(tǒng)計學(xué)采用單因素方差分析中的Dunnett-t,SNK-q檢驗,所有數(shù)據(jù)輸入SPSSl3.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行處理.

4、 結(jié)果： 1.HE染色:術(shù)后3天的標(biāo)本HE染色顯示正常聲帶粘膜上皮及固有層缺失,新鮮肉芽組織形成并有少量膠原纖維表達(dá);5天受損區(qū)域上皮爬行并增生形成復(fù)層結(jié)構(gòu),新鮮肉芽組織、膠原大量形成;7天上皮爬行基本完成,LP內(nèi)再生膠原組織形成粗大束狀結(jié)構(gòu);14天損傷區(qū)上皮變薄呈單層上皮結(jié)構(gòu),LP內(nèi)膠原組織重排. 2.免疫組化染色:對照組中Ⅲ型膠原主要分布于固有層淺層和深層.纖維粘連蛋白主要分布于基底膜區(qū)域,少量表達(dá)于固有層淺層.實驗

5、組Ⅲ型膠原和纖維粘連蛋白14天內(nèi)各時間段兩者表達(dá)都與對照組有顯著性差異(P<0.05),但各實驗組之間表達(dá)無差異(P>0.05).表達(dá)范圍擴(kuò)大至整個固有層,表達(dá)不均勻,呈斑片狀,固有層內(nèi)細(xì)胞增多.且Ⅲ型膠原和纖維粘連蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(Y=0.667,P=0.001). 結(jié)論： 1.盡管大鼠聲帶較小,但在內(nèi)窺鏡輔助下能夠準(zhǔn)確損傷大鼠聲帶被覆層,構(gòu)建大鼠聲帶損傷動物模型,觀察大鼠聲帶瘢痕形成過程,為聲帶損傷及聲帶瘢痕的形成