三七總皂甙單體成分Rb1對(duì)單側(cè)輸尿管梗阻后大鼠腎間質(zhì)纖維化的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：腎間質(zhì)纖維化(RIF)是各種腎臟疾病進(jìn)展至終末期腎功能衰竭的共同途徑。多種細(xì)胞因子參與的小管上皮細(xì)胞-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化是腎間質(zhì)纖維化的重要機(jī)制。研究提示在各種病因?qū)е碌哪I臟損傷過程中，氧化應(yīng)激發(fā)揮了重要的作用。本實(shí)驗(yàn)通過單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)構(gòu)建腎間質(zhì)纖維化模型，研究Rb1治療腎間質(zhì)纖維化的作用及其機(jī)制，為臨床腎間質(zhì)纖維化的治療提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：雄性SD大鼠100只隨機(jī)分為UUO組、Rb1治療組、氯沙坦(AR

2、B)組和假手術(shù)(SOR)組，平均每組25只。從術(shù)后24小時(shí)開始，Rb1組予人參皂甙Rb1溶液腹腔注射50mg/kg.d，其余三組予以同等體積生理鹽水腹腔注射。ARB組予氯沙坦溶液20mg/kg.d，其余三組予以同等體積生理鹽水灌胃。術(shù)后3天、7天、14天、21天和28天每組隨機(jī)選擇5只大鼠處死，測體重、收集24小時(shí)尿標(biāo)本、血標(biāo)本和腎組織。全自動(dòng)生化分析儀檢測血生化腎功能改變；腎臟組織勻漿檢測OH·、MDA、SOD，HE染色、MASSON

3、染色和PAS染色觀察腎組織形態(tài)學(xué)變化的影響；實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR，Western雜交檢測術(shù)后大鼠TGF-β1、CTGF、a-SMA；免疫組化檢測術(shù)后大鼠TGF-β1、CTGF、a-SMA， FN、Col Ⅰ的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)應(yīng)用單因素方差分析比較組間各個(gè)因子表達(dá)差異，用SNK進(jìn)行組間兩兩比較。 結(jié)果：①在不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠24h尿蛋白總量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；同一組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)動(dòng)態(tài)觀察24小時(shí)尿蛋白總量無明顯變化(P>

4、0.05)。②uu0組大鼠術(shù)后3天、7天，血肌酐明顯高于SOR組(P<0.05)；術(shù)后3天、7天、14天，Rb1治療組大鼠血肌酐水平均不同程度低于UUO組(P<0.05)，與ARB治療相近。術(shù)后21天、28天各組大鼠血肌酐水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。③UUO組大鼠術(shù)后3天、7天，OH·、MDA明顯高于SOR組(P<0.05)，SOD明顯低于SOR組(P<0.05)，術(shù)后14天該值有所恢復(fù)，至術(shù)后21天、28天又回到正常水平，與SO

5、R組無明顯差異(P>0.05)。術(shù)后3天、7天、14天，Rbl治療組大鼠OH·、MDA水平均不同程度低于UUO組(P<0.05)；SOD水平均不同程度高于UU0組(P<0.05)，與ARB治療相近。④UUO組隨著造模時(shí)間延長，炎細(xì)胞浸潤程度和腎間質(zhì)損傷程度逐漸加重(P<0.05)。在不同時(shí)間點(diǎn)，Rb1治療組炎細(xì)胞浸潤和腎間質(zhì)損傷均有不同程度減輕(P<0.05)，與ARB治療相近。⑤與SOR組相比，UUO組腎小管間質(zhì)TGF-β1，CTGF

6、，a-SMA，ColⅠ，F(xiàn)N表達(dá)及腎小管間質(zhì)損傷指數(shù)明顯增高(P<0.05)，UUO術(shù)后3天a-SMA開始表達(dá)，7天和14天表達(dá)更為明顯。與UUO組相比，Rb1治療后腎小管間質(zhì)TGF-β1，CTGF，a-SMA，Col Ⅰ，F(xiàn)N表達(dá)顯著減少(P>0.05)，Rb1與ARB治療組相近。⑥隨著梗阻時(shí)間的延長，大鼠腎臟TGF-β1、CTGF、a-SMAmRNA和蛋白質(zhì)水平進(jìn)行性增高(P<0.05)。各時(shí)間點(diǎn)Rb1治療組mRNA和蛋白水平較UU

7、O組顯著降低(P<0.05)，與ARB治療相近。⑦OH·、MDA的表達(dá)與TGF-β1、CTGF、a-SMA、ColⅠ、FN、間質(zhì)相對(duì)面積呈正相關(guān)：SOD的表達(dá)與TGF-β1、CTGF、a-SMA、Col Ⅰ、FN、間質(zhì)相對(duì)面積呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)論： 1．UUO中存在氧化應(yīng)激，氧化應(yīng)激可以激活TGF-β1/CTGF信號(hào)通路，引起腎問質(zhì)纖維化。 2．Rb1阻止轉(zhuǎn)分化，減少細(xì)胞外基質(zhì)，能有效抗腎間質(zhì)纖維化。 3．R