人E-鈣粘素融合蛋白基質(zhì)化促進(jìn)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的研究.pdf

1、細(xì)胞生長受諸多因素的影響，其中，可溶性生物信號分子、不溶性細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞表面粘附分子共同構(gòu)成的細(xì)胞外微環(huán)境，對細(xì)胞的增殖、遷移及其功能表達(dá)起調(diào)節(jié)控制作用。近年來，利用組織工程學(xué)原理仿生構(gòu)建細(xì)胞外微環(huán)境已經(jīng)成為再生醫(yī)學(xué)和生物材料學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。其中，基于基因重組生物工程技術(shù)的多功能融合蛋白的成功研制為仿生構(gòu)建人工細(xì)胞外基質(zhì)提供了新的方向。本論文工作旨在設(shè)計(jì)、制備仿生細(xì)胞間相互作用的細(xì)胞外基質(zhì)材料，并用于臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUC-MSC

2、s)體外培養(yǎng)，考察并揭示其對hUC-MSCs生物學(xué)行為的影響及其調(diào)控規(guī)律，為間充質(zhì)干細(xì)胞的體外大量擴(kuò)增及分化應(yīng)用提供了理論和實(shí)踐基礎(chǔ)。
　　本論文工作中，我們首先將本實(shí)驗(yàn)室開發(fā)的人E-鈣粘素與IgG Fc的融合蛋白(hE-cad-Fc)吸附固定于聚苯乙烯培養(yǎng)板表面，并考察了其作為二維細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)對hUC-MSCs增殖活性的影響。Elisa檢測結(jié)果表明hE-cad-Fc能夠穩(wěn)定吸附在疏水材料表面;細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)表明hE-cad-Fc基

3、質(zhì)化顯著改善材料表面的hUC-MSCs細(xì)胞黏附，且其黏附具有鈣離子依賴性;EdU和細(xì)胞骨架染色結(jié)果顯示，hE-cad-Fc基質(zhì)在促進(jìn)hUC-MSCs增殖的同時(shí)，能更好的保持細(xì)胞長梭型的細(xì)胞形態(tài);免疫熒光染色顯示hE-cad-Fc基質(zhì)表面hUC-MSCs的E-cadherin和β-catenin蛋白表達(dá)上調(diào)。
　　我們進(jìn)一步將hE-cad-Fc用于PLGA微球表面改性，并用于hUC-MSCs的三維培養(yǎng)，考察了其對細(xì)胞黏附、形態(tài)及增殖

4、的影響。掃描電子顯微鏡(SEM)觀察顯示PLGA微球表面光滑，呈獨(dú)立分散的規(guī)整的圓球形，粒徑約10-30μm。Elisa及免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)表明hE-cad-Fc可以均勻、穩(wěn)定吸附在PLGA微球表面，最大吸附量為1.95μg/cm2，且其飽和吸附量及吸附效率均高于二維平板。CCK-8細(xì)胞活性檢測結(jié)果表明hE-cad-Fc表面改性PLGA微球?qū)UC-MSCs具有良好的細(xì)胞生物相容性。最后，EdU染色和中、高密度細(xì)胞培養(yǎng)條件下細(xì)胞骨架染色進(jìn)