煙酸通過誘導血紅素加氧酶1表達抑制內(nèi)皮細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、目的：探討煙酸能否通過誘導血紅素加氧酶1表達抑制氧化應激導致的內(nèi)皮細胞凋亡，以及煙酸誘導血紅素加氧酶1表達的信號途徑。進一步闡明煙酸抗動脈粥樣硬化的藥理機制，為煙酸的臨床應用提供新的實驗依據(jù)。
　　方法：過氧化氫(100uM)用于誘導氧化應激，實驗分別使用不同濃度煙酸(0.25，0.5或1.0mM)預處理人臍靜脈內(nèi)皮細胞不同時間(2、4、6、12或24h)，然后加入H2O2；在抑制實驗中，HUVECs分別使用p38-MAPKs途徑

2、抑制劑SB203580(10uM)、ERKs途徑抑制劑PD98059(25uM)、JNKs途徑抑制劑SP600125(10uM)或HO-1抑制劑ZnPPIX(10uM)預處理，然后在加入煙酸或H2O2。熒光實時定量PCR(RT-PCR)檢測HO-1 mRNA的表達，Western Blot檢測HO-1蛋白的變化，同時測量HO-1活性，TUNEL法檢測內(nèi)皮細胞凋亡。
　　結果：①在煙酸(1mM)處理2、4、6、12或24h后再加入H

3、2O2(100uM)孵育12h，H2O2+Niacin組HO-1 mRNA和蛋白表達較H2O2組均有顯著升高(P<0.05)，HO-1表達隨煙酸作用時間延長總體呈升高趨勢；當HUVECs分別用0.25、0.5或1.0mM的煙酸預處理24h后，H202+Niacin組的HO-1 mRNA和蛋白表達與H2O2組或?qū)φ战M相比顯著升高(P<0.05)，且HO-1表達隨煙酸濃度濃度增加總體呈升高趨勢；
　?、谠跓熕?1mM)處理2、4、6、

4、12或24h后再加入H2O2(100uM)孵育12h，H2O2+Niacin組HO-1活性較H2O2組均有顯著升高(P<0.01)，且HO-1活性隨時間延長總體呈升高趨勢。以對照組或H2O2組作為對照，當HUVECs分別用0.25、0.5或1.0mM的煙酸預處理24h后，H2O2+Niacin組的HO-1活性與H2O2組或?qū)φ战M相比顯著升高(P<0.01)，且HO-1活性隨濃度增加總體呈升高趨勢；
　?、墼谘趸瘧?H2O2)條件

5、下，SB203580(p38-MAPKs抑制劑，10uM)處理能顯著抑制煙酸誘導的HUVECs HO-1表達(P<0.01)，而PD98059(ERKs抑制劑，25uM)及SP600125(JNKs抑制劑，10uM)無此效應；
　?、?H2O2組較空白對照組內(nèi)皮細胞凋亡指數(shù)顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；H2O2+Niacin組與H2O2組比較內(nèi)皮細胞凋亡指數(shù)顯著減少(P<0.01)；HO-1抑制劑ZnPPⅨ(10uM