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文檔簡介
1、目的:研究血紅素誘導(dǎo)肺泡巨噬細胞血紅素加氧酶-1合成及其抗炎作用的分子機制。
方法:通過在體支氣管肺泡灌洗獲取大鼠肺泡巨噬細胞(alveolar macrophages,AMs)。經(jīng)瑞氏-吉姆薩染色鑒定純度和臺盼藍染色鑒定細胞活力后,將AMs分組。實驗共分為七個組:對照組(Saline);脂多糖組(LPS);血紅素組(Hemin);脂多糖+血紅素組(LPS+Hemin);脂多糖+血紅素+血紅素加氧酶-1的活性抑制劑鋅原卟啉
2、(Zinc protoporphyrinⅨ)組(LPS+Hemin+Znpp);脂多糖+血紅素+P-p38MAPK的阻斷劑SB203580組(LPS+Hemin+SB)和SB組。各組細胞于刺激30min后,用Western blot法檢測AMs中P-p38MAPK的表達水平;各組細胞于刺激24h后,用Western blot法檢測AMs中HO-1的表達水平,同時測量細胞精氨酸酶活性、吞噬能力和培養(yǎng)上清中NO,IL-10含量。
3、 結(jié)果:與LPS組相比,Hemin組P-p38MAPK,HO-1表達明顯增多(P<0.05),NO分泌減少同時精氨酸酶活性明顯增強(P<0.05),而吞噬能力無明顯差異;與LPS組相比,LPS+Hemin組P-p38MAPK,HO-1表達明顯增多(P<0.05),NO分泌減少而精氨酸酶活性和吞噬能力明顯增強(P<0.05);與LPS+Hemin組相比,LPS+Hemin+SB組的P-p38MAPK,HO-1表達明顯減少(P<0.05)
4、,同時NO分泌增多而精氨酸酶活性和吞噬能力明顯減弱(P<0.05);與LPS+Hemin組相比,LPS+Hemin+Znpp組NO分泌增多而精氨酸酶活性和吞噬能力明顯減弱(P<0.05);與其余組相比,LPS組IL-10分泌明顯增多(P<0.05),而其余各組IL-10的分泌量無統(tǒng)計學(xué)差異。
結(jié)論: Hemin可通過提高AMs P-p38MAPK水平使HO-1表達增加;HO-1表達增加可以使AMs精氨酸酶活性和吞噬能力增強
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