醛固酮對人近端腎小管上皮細胞基質(zhì)金屬蛋白酶-2表達及細胞增殖的影響.pdf

1、目的：腎小管間質(zhì)損害的嚴重程度直接與腎臟病變的發(fā)展速度和預(yù)后密切相關(guān)，甚至超過了腎小球或腎血管病變本身，腎間質(zhì)纖維化是各種慢性腎臟疾病發(fā)展至終末期腎功能衰竭的主要病理損害。腎間質(zhì)纖維化的病理特征之一是腎間質(zhì)細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)積聚，主要是細胞外基質(zhì)合成與降解失衡所致，基質(zhì)金屬蛋白酶(matrismetalloproteinases，MMPs)是降解細胞外基質(zhì)的主要酶系，MMPs活性降低將使細胞外基

2、質(zhì)分解減少，引起細胞外基質(zhì)積聚，導(dǎo)致腎纖維化。MMP-2是MMPs中重要成員，其相對分子質(zhì)量為72000，又稱為明膠酶A，能在腎小管上皮細胞表達，可降解多種細胞外基質(zhì)成分，如Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠原，纖維連接蛋白等，MMP-2的活性受膜型基質(zhì)金屬蛋白酶-1及其組織抑制劑的影響。 近年研究表明，腎素—血管緊張素—醛固酮系統(tǒng)(renin-angiotensin-aldosteronesystem，RAAS)的激活在腎臟纖維化發(fā)生發(fā)展中起重要

3、作用，過去一直認為血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)是造成腎損害的主要物質(zhì)，近年研究證實，醛固酮(aldosterone，ALD)在進展性腎損害中發(fā)揮重要作用，其具有不完全依賴于AngⅡ的獨立作用，特別是在致組織器官纖維化方面，是有絲分裂和膠原合成的強烈刺激劑，可以促進腎臟纖維化，ALD在腎纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用及作用機制逐漸成為研究熱點。近來研究表明腎小管間質(zhì)病變的嚴重程度比腎小球病變更能決定預(yù)后，多種致腎纖維化因素可

4、作用于腎臟，使腎臟局部細胞因子發(fā)生變化，從而使MMPs活性下降，ECM分解減少，終致腎纖維化。有研究表明ALD能使腎組織轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforminggrowthfactorbeta1，TGF-β1)表達增加，TGF-β1能使MMP-2表達下降。楊敏等研究發(fā)現(xiàn)當結(jié)締組織生長因子(Connectivetissuegrowthfactor,CTGF)和TGF-β1聯(lián)合刺激鼠腎間質(zhì)成纖維細胞48小時后，MMP-2活性及蛋白均明顯

5、降低，用定量PCR方法檢測刺激后轉(zhuǎn)錄水平，發(fā)現(xiàn)MMP-2mRNA的變化與蛋白質(zhì)的變化趨向一致，說明CTGF、TGF-β1協(xié)同可能影響MMP-2的基因轉(zhuǎn)錄水平、蛋白質(zhì)生成量或者細胞轉(zhuǎn)運、分泌MMP-2等環(huán)節(jié)，最終使MMP-2活性降低，降解細胞外基質(zhì)的能力減弱。由此我們推測ALD對體外培養(yǎng)的人近端腎小管上皮細胞MMP-2的表達存在影響。 基于以上研究，ALD對人近端腎小管上皮細胞MMP-2的表達有何影響，是否能減少其表達，促進腎小管

6、間質(zhì)纖維化的進展，檢索國內(nèi)外文獻未見相關(guān)報道。因此，本課題利用體外培養(yǎng)的人近端腎小管上皮細胞，研究ALD對腎小管上皮細胞MMP-2的表達及細胞增殖的影響，以探討ALD在腎間質(zhì)纖維化中的作用及可能的發(fā)病機制，從而為腎纖維化治療提供新策略。 方法： 1人近端腎小管上皮細胞(HK2)的培養(yǎng)：HK2購自中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)細胞中心，使用RPMI1640培養(yǎng)液(含10％小牛血清、100U/L青霉素和100mg/L鏈霉素)，于37℃、5

7、％CO2環(huán)境中培養(yǎng)。 2將人近端腎小管上皮細胞分2組：空白對照組及不同濃度(10-11、10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)ALD刺激組。應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)觀察不同濃度及不同時間ALD對HK2MMP-2mRNA的表達的影響；四甲基偶氮唑藍(MTT)法觀察不同濃度的ALD對HK2增殖的影響。 結(jié)論： 1ALD能夠抑制人近端腎小管上皮細胞MMP-2的表達，促進腎小管上皮細胞增殖，并